1.一种S-(+)-2，2-二甲基环丙甲酰胺的两步微生物制备方法，其特征 是所述的微生物为从土壤和污水中筛选到的红球菌属(Rhodococcus)的马 红球菌(Rhodococcuss equi)，CCTCC No.M 205115和代尔夫特菌属 (Delftia)的Delftia tsuruhatensis菌，CCTCC No.M 205114，首先利用 CCTCC No.M 205115催化外消旋2，2-二甲基环丙甲腈生产外消旋2，2-二 甲基环丙甲酰胺，再利用CCTCC No.M 205114选择性水解外消旋2，2- 二甲基环丙甲酰胺生产S-(+)-2，2-二甲基环丙甲酰胺；或利用CCTCC No. M 205115和CCTCC No.M 205114联合转化外消旋2，2-二甲基环丙甲腈 生产S-(+)-2，2-二甲基环丙甲酰胺。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是所述CCTCC No.M 205115催化外消旋2，2-二甲基环丙甲腈生产外消旋2，2-二甲基环丙甲酰 胺，其方法：(1)配制种子培养基，各组分的含量均为重量体积百分比，g/L：葡 萄糖10.0～20.0，酵母膏5.0～10.0，蛋白胨2.0～5.0，NaCl 1.0～3.0， K2HPO4 1.0～2.0，KH2PO4 1.0～2.0，MgSO4 0.2～0.5，FeSO4 0.01～ 0.05，CoCl2 0.01～0.05，CaCl2 0.05～0.1，pH自然；

(2)配制CCTCC No.M 205115含诱导剂的发酵培养基，各组分的含 量均为重量体积百分比，g/L：葡萄糖10.0～20.0，酵母膏3.0～5.0，蛋 白胨2.0～5.0，NaCl 1.0～3.5，K2HPO4 1.0～2.0，KH2PO4 1.0～2.0， MgSO4 0.2～0.5，FeSO4 0.01～0.05，CoCl2 0.01～0.05，CaCl2 0.01～ 0.06，诱导剂1.0～2.0，以自来水配制，用1.0M的盐酸或NaOH溶液调 节pH值6.0～8.0；所述的诱导剂为2，2-二甲基环丙甲腈、2，2-二甲基环丙 甲酰胺、丙烯酰胺、己内酰胺、乙酰胺、丙烯腈中的一种；

(3)制备CCTCC No.M 205115菌体：将经斜面活化的CCTCC No. M 205115接入种子培养基中，培养条件：pH5.0～9.0，温度20～50℃，培 养24～48h，将获得的种子液；将种子液接入含诱导剂的发酵培养基中， 培养条件：温度20℃～40℃，初始pH为6.0～8.0，诱导培养60～80h；诱 导培养液经离心或过滤收集，获得菌体；

(4)生物转化制备2，2-二甲基环丙甲酰胺：将上述菌体用0.9％生理盐 水洗涤后，悬浮于磷酸盐缓冲溶液、或Tris-盐酸缓冲溶液、或柠檬酸缓 冲溶液中，缓冲溶液pH在6.5～9.0之间，加入底物2，2-二甲基环丙甲 腈，底物浓度用g/L表示为0.8～20；转化温度20～40℃，时间0.5～4h；

(5)2，2-二甲基环丙甲酰胺的提取：转化液离心除去菌体，在减压 下，蒸发上清液，得产物2，2-二甲基环丙甲酰胺。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是所述CCTCC No.M 205114选择性水解外消旋2，2-二甲基环丙甲酰胺生产S-(+)-2，2-二甲基环 丙甲酰胺，其方法：(1)配制种子培养基，各组分的含量均为重量体积百分比，g/L：葡 萄糖10.0～20.0，酵母膏5.0～10.0，蛋白胨2.0～5.0，NaCl 1.0～3.0， K2HPO4 1.0～2.0，KH2PO4 1.0～2.0，MgSO4 0.2～0.5，FeSO4 0.01～ 0.05，CoCl2 0.01～0.05，CaCl2 0.05～0.1，pH自然；

(2)配制CCTCC No.M 205114含激活剂的发酵培养基，各组分的含 量均为重量体积百分比，g/L：甘露醇10.0～20.0，酵母膏5.0～5.0，蛋 白胨2.0～5.0，NaCl 1.0～3.5，K2HPO4 1.0～2.0，KH2PO4 1.0～2.0， MgSO4 0.2～0.5，FeSO4 0.01～0.05，CaCl2 0.01～0.06，激活剂1.0～ 2.0，以自来水配制，用1.0M的盐酸或NaOH溶液调节pH值6.0～8.0； 所述的激活剂是己内酰胺、异丁腈、2，2-二甲基环丙甲酰胺中的一种；

(3)制备CCTCC No.M 205114菌体：将经斜面活化的CCTCC No.M 205114接入种子培养基中，培养条件：pH6.0～8.0，温度20～40℃，培养 24～48h，将获得的种子液；将种子液接入发酵培养基中，培养条件：温 度20℃～40℃，初始pH为6.0～8.0，培养60～80h；诱导培养液经离心或 过滤收集，获得菌体；

(4)生物转化S-(+)-2，2-二甲基环丙甲酰胺：将上述菌体用0.9％生理 盐水洗涤后，悬浮于磷酸盐缓冲溶液、或Tris-盐酸缓冲溶液、或柠檬酸 缓冲溶液中，缓冲溶液pH在6.5～9.0之间，加入外消旋2，2-二甲基环丙 甲酰胺，底物2，2-二甲基环丙甲酰胺的浓度用g/L表示为1.14～22.8；转 化温度20～40℃，时间4～13h；

(5)S-(+)-2，2-二甲基环丙甲酰胺的提取：转化液离心去除菌体，用氢 氧化钠调节pH为12，用等体积的乙酸乙酯萃取，减压蒸馏，甲醇重结 晶，得到S-(+)-2，2-二甲基环丙甲酰胺。

4.根据权利要求1或2或3所述的制备方法，其特征是所述CCTCC No.M 205115和CCTCC No.M 205114联合转化外消旋2，2-二甲基环丙 甲腈生产S-(+)-2，2-二甲基环丙甲酰胺，其方法：(1)将制备的CCTCC No.M 205115菌体用0.9％生理盐水洗涤后，悬 浮于磷酸盐缓冲溶液、或Tris-盐酸缓冲溶液、或柠檬酸缓冲溶液中，缓 冲溶液pH在6.5～9.0之间，加入底物2，2-二甲基环丙甲腈，底物浓度用 g/L表示为4.75～9.5；转化温度20～40℃，时间0.5～4h；离心除去菌 体；

(2)将制备的CCTCC No.M 205114菌体用0.9％生理盐水洗涤后，加 入上述除去菌体的含2，2-二甲基环丙甲酰胺的转化液中，继续转化 4～6h，转化温度20～40℃；

(3)转化液经乙酸乙酯萃取、重结晶，得到S-(+)-2，2-二甲基环丙甲 酰胺。