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专利号: 2005100619690
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用从土壤中筛选分离到新的微生物转化甘油生产二羟基丙 酮的方法,其特征是所述的微生物是棒孢酵母属(Clavispora)的葡萄牙 棒孢酵母(Clavispora lusitaniae),CCTCC No.M 205116或毕赤酵母属 (Pichia)的膜醭毕赤酵母(Pichia membranifaciens),CCTCC No.M 205117,葡萄牙棒孢酵母或膜醭毕赤酵母与含碳源、氮源、无机盐的培养 基,底物为甘油,进行发酵,然后分离发酵中的二羟基丙酮,并进行提纯。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征是所述的培养基组成,重量 kg/体积L的百分比,为:甘油或甘露醇:O.5%~12%,酵母粉:O.1%~2.0%, 蛋白胨O.1%~2.O%,(NH4)2SO4:O%~1.5%,NaH2PO4·2H2O:O.1%~O.8%, MgSO4:0.01%~O.1%,CaCO3:O.1%~0.4%,以自来水配制。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征是所述的发酵液的分离、提纯 步骤为:采用体积比为95∶5的乙酸乙酯-乙醇混合溶剂为流动相,使用 石油醚湿法装柱,在高径比10~40∶1,洗脱流速1mL/min~10mL/min,加 样量为柱床体积3%~10%时,收集含二羟基丙酮段样品,进行真空浓缩, 在95∶5的乙酸乙酯-乙醇溶液中获得白色二羟基丙酮结晶。

4.根据权利要求1或2所述的方法,其特征是在培养基中接入CCTCC No.M 205116或CCTCC No.M 205117的斜面或种子液接种,进行发酵, 培养条件:温度20℃~40℃,初始pH为4.0~7.0,培养时间为24h~72h。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征是培养条件:温度28℃~35℃, 初始pH为7.0,培养时间为48 h。

6.根据权利要求1或2所述的方法,其特征是在培养基中接入菌种 CCTCC No.M 205116或CCTCC No.M 205117的斜面或种子液接种,培 养菌体,培养条件:温度在20℃~40℃,初始pH为4.0~7.0,培养时间为 48h~120h,培养过程中,在菌体刚开始生长的时候开始流加入微生物反 应的底物甘油;或在菌体生长对数期后再进行流加入微生物反应的底物甘 油。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征是培养条件:温度28℃~35℃, 初始pH为7.0,培养时间为72h。

8.根据权利要求1或2所述的方法,其特征是在培养基中接入菌种 CCTCC No.M 205116或CCTCC No.M 205117,用斜面或种子液接种, 培养菌体,培养条件:温度在20℃~40℃,初始pH为4.0~7.0,培养菌体 到对数生长期,进行离心分离,得到菌体,将得到的菌体加入到底物甘油 溶液中,利用菌体转化底物甘油,底物甘油浓度为0.5%~15.0%,反应时 间1h~100h。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征是培养条件:温度28℃~35℃, 初始pH为7.0,反应时间为24h。