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专利号: 2008101221913
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1. 一种微生物催化制备亚氨基二乙酸的方法,所述方法包括:在以亚氨基乙腈为底物、以粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)ZJUTB10培养获得的腈水解酶为催化剂的反应体系中,于pH6.0~9.0、10~60℃下进行水解反应,得到所述亚氨基二乙酸。

2. 如权利要求1所述的方法,其特征在于所述反应体系中底物亚氨基乙 腈初始浓度为0.05〜0.2mol/L。

3. 如权利要求2所述的方法,其特征在于反应过程中底物亚氨基乙腈浓 度低于0.01mol/L时,继续补入底物亚氨基乙腈至亚氨基乙腈浓度为 0.05〜0.2mol/L。

4. 如权利要求2所述的方法,其特征在于所述腈水解酶来自粪产碱杆菌 ZJUTB10培养获得的含酶细胞,所述含酶细胞添加量以含酶细胞湿重 计为10~50g/L。

5. 如权利要求2所述的方法,其特征所述反应在水中或pH6〜9的磷酸盐 緩沖液中进行。

6. 如权利要求3所述的方法,其特征在于所述含酶细胞由如下方法制备 得到:粪产碱杆菌ZJUTB10接种至适用于粪产碱杆菌的发酵培养基, 于20〜40。C下培养24〜96小时,并在培养开始0〜6小时时间内加入终浓 度为0.1%~0.5%的诱导剂,所述诱导剂为下列之一:正丁腈、异丁腈、 己内酰胺,培##到的发酵液经离心或膜分离,得到所述含酶细胞。

7. 如权利要求4所述的方法,其特征在于所述适用于粪产碱杆菌的发酵 培养基组成如下:醋酸铵0.5%〜2.0%,酵母膏0.3%~0.8, K2HP04 0.3%〜0.8% , MgS04 0.01%~0.1% , FeS04 0.001%~0.01% , NaCl 0.05%~0.5%, pH7.0〜8.5。

8. 如权利要求l所述的方法,其特征在于所述方法如下:(1) 粪产碱杆菌ZJUTB10接种至种子培养基,30°C、 200rpm下培养 24小时,得到种子液;所述种子培养基组成如下:醋酸4妄1%, 酵母膏0.5%, K2HPO40.5%, MgSO40.02%, FeS04 0.003%, NaCl 0.1%, pH7.5;(2) 发酵培养基以6%体积比接种量接种种子液,30。C下进行培养, 于培养开始6小时时加入0.3°/。的正丁腈,发酵培养总时间48〜96 小时,得到发酵液;所述发酵培养基组成如下:醋酸铵1%,酵 母膏0.5%, K2HPO40.5%, MgSO40.02%, FeS04 0.003%, NaCl 0.1%, pH7.5;(3) 取发酵液,膜过滤分离得到的菌体细胞以去离子水洗涤,得到细 胞液,取细胞液以去离子水稀释至细胞浓度为10~50g/L,加入底 物亚氨基乙腈至亚氨基乙腈浓度为0.05~0.2mol/L,于20~40°C 、 100~300rpm下进行水解反应24〜72小时,水解反应结束后,于 水解液中得到所述亚氨基二乙酸。

9. 粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis) ZJUTBIO,保藏于中国典型培养物 保藏中心,地址:中国.武汉.武汉大学,430072,保藏编号CCTCCNo: M 208168,保藏日期2008年10月22日。