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专利号: 2008101637505
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1. 一种生物催化2-氰基吡嗪生产吡嗪酰胺的方法,所述方法包括:在以2-氰基吡嗪为底物、以粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)培养获得的腈水合酶为催化剂的反应体系中,于pH6.0~8.0、20~40℃下进行催化水合反应,制得所述吡嗪酰胺。

2. 如权利要求1所述的方法,其特征在于所述粘质沙雷氏菌为粘质沙雷 氏菌(5"erraft'a marcescem ) ZJB-09104,保藏于中国典型培养物保藏中 心,保藏日期2008年11月18日,保藏编号CCTCC No. M 208231。

3. 如权利要求1或2所述的方法,其特征在于所述反应体系中,所述底 物2-氰基吡。秦初始浓度为10-50 g/L。

4. 如权利要求3所述的方法,其特征在于所述腈水合酶来自粘质沙雷氏 菌培养获得的含酶细胞,所述反应体系中含酶细胞终浓度以含酶细胞 湿重计为1〜50g/L。

5. 如权利要求4所述的方法,其特征在于所述含酶细胞由如下方法制备 得到:粘质沙雷氏菌接种至适用于粘质沙雷氏菌的发酵培养基中,在 20。C〜40。C、初始pH4.0〜8.0条件下震荡培养至菌体对数生长期,离心 分离,得到所述含酶细胞。

6. 如权利要求5所述的方法,其特征在于所述适用于粘质沙雷氏菌的发 酵培养基组成如下:葡萄糖5〜50g/L,酵母膏1〜20g/L,尿素1〜20g/L, 味精0.1~5g/L, K2HPO40.1~20g/L, KH2PO40.1〜5 g/L, MgSO40.1〜20 g/L, CoCl2或FeS04 0.05〜1 g/L,溶剂为水,pH值4.0〜8.0。

7. 如权利要求l所述的方法,其特征在于所述方法如下:(1 )粘质沙雷氏菌ZJB-09104接种至种子培养基,28〜32。C培养18-24 小时,得到种子液;所述种子培养基组成如下:蔗糖5〜80g/L, 酵母粉l~20g/L,NaCl 0.1~5 g/L, K2HPO40.1〜l g/L,MgSO40.1~l g/L,溶剂为水,pH^直4.0-8.0;(2) 步骤(1)种子液以1~10%体积比接种至发酵培养基,在 20。C〜40。C、初始pH4.0~8.0条件下震荡培养至菌体对数生长期, 离心分离,得到菌体含酶细胞;所述发酵培养基组成如下:葡萄 糖5~50g/L,酵母膏l~20g/L,尿素l~20g/L,味精0.1〜5g/L, K2HPO40.1〜20 g/L, KH2PO40.1〜5 g/L, MgS04 0.1~20 g/L, CoCl2 或FeS04 0.05~1 g/L,溶剂为水,pH值6.0〜7.0;(3) 步骤(2)菌体含酶细胞添加至含有2-氰基吡嗪的0.1 M、 pH8.0 的磷酸盐緩沖液反应体系中,所述反应体系中菌体含酶细胞以含 酶细胞湿重计浓度为l〜20g/L, 2-氰基吡。秦浓度为10〜30g/L,于 pH6.0~8.0、 20〜40。C下进行催化水合反应20~30h,制得所述吡。秦 酰胺。

8.粘质沙雷氏菌(&rraria m^r"cm?) ZJB-09104,保藏于中国典型培养 物保藏中心,地址:中国.武汉.武汉大学430072,保藏于中国典型培 养物保藏中心,保藏日期2008年11月18日,保藏编号CCTCC No. M 208231。