1.一种3,5-二硝基水杨酸肼酶联免疫检测试剂盒,包括盒体、特异性抗体溶液、3,
5-二硝基水杨酸肼标准溶液、酶标板、样品稀释液、洗涤液、二抗溶液、显色A液、显色B液和终止液,其特征在于所述特异性抗体为兔抗3,5-二硝基水杨酸肼抗体,所述酶标板为孔内包被有半抗原与卵清蛋白偶联物的ELISA板条,所述二抗溶液为辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体稀释液; 其中,所述的半抗原为3,5-二硝基水杨酸肼和对羧基苯甲醛反应,通过氨醛缩合所得化合物,具有式(I)所示的结构: 所述的特异性抗体溶液是由化合物(I)偶联牛血清蛋白得到的偶联物,经透析纯化,免疫实验用兔,纯化兔血清,调配浓度得到的抗体溶液;所述偶联物具有式(II)所示结构: 所述的半抗原与卵清蛋白偶联物是由化合物(I)与卵清蛋白通过活泼酯法交联后,透析纯化的产物,具有式(III)所示结构:
2.一种权利要求1所述3,5-二硝基水杨酸肼酶联免疫检测试剂盒的使用方法,其特征在于包括以下步骤: (1)样品衍生化前处理;
(2)在试剂盒的酶标板孔中加入50μL溶解有样品的抗体稀释液和50μL特异性抗体溶液,室温反应30min,洗涤液洗涤,拍干; (3)在(2)所述酶标板孔中加入二抗稀释液100μL,室温反应20min,洗涤液洗涤,拍干; (4)在(3)所述酶标板孔中加入现配的显色液100μL,室温蔽光显色10min; (5)在(4)所述酶标板孔中加入终止液体50μL,测定OD450值; 其中,步骤(1)所述样品衍生化前处理包括盐酸水解、邻硝基苯甲醛衍生、乙酸乙酯提取、样品稀释液复溶和正己烷脱脂步骤。
3.根据权利要求2所述3,5-二硝基水杨酸肼酶联免疫检测试剂盒的使用方法,其特征在于步骤(4)所述现配的显色液是由显色A液∶显色B液按照1∶1的体积比配制。