1、呕吐毒素的酶联免疫吸附检测专用测试盒，其包括洗涤液、显色液A、 显色液B和终止液，其特征在于：其还包括包被有呕吐毒素固相抗原的包被板、 呕吐毒素(DON)标准品、呕吐毒素(DON)单克隆抗体冻干品以及酶标记的 羊抗鼠抗体冻干品。

2、呕吐毒素的酶联免疫吸附检测专用测试盒的制备，其特征在于：其包括 以下步骤，包被板的制作、呕吐毒素DON标准品的制作、呕吐毒素-牛血清白 蛋白DON-BSA偶联物的制备、呕吐毒素-卵清蛋白DON-OVA偶联物的制备、 抗呕吐毒素DON单克隆抗体及其溶液的制备、完全福氏佐剂的制备、不完全福 氏佐剂的制备、的酶标记的羊抗鼠抗体冻干品的制备；洗涤液的制备；显色液A 的制备；显色液B的制备；终止液的制备。

3、根据权利要求2所述呕吐毒素的酶联免疫吸附检测专用测试盒的制备， 其特征在于：所述包被板包被呕吐毒素固相抗原，其采用96或48或24孔微孔 板，用10mmol/L～100mmol/L pH9～10Na2CO3-NaHCO3的缓冲液作为包 被液，将呕吐毒素-卵清蛋白(DON-OVA)稀释至0.1μg/m L～1.0μg/m L，96或48 或24孔微孔板各孔加100μl，2℃～8℃放置过夜，弃去包被液，洗涤2次～5次， 按加入含1％～5％牛血清白蛋白(溶于pH7～8的磷酸盐缓冲液)，2℃～8℃封闭 过夜，弃去封闭液，吹干，板条密封后置-20℃～-40℃冷冻保存。

4、根据权利要求2所述呕吐毒素的酶联免疫吸附检测专用测试盒的制备， 其特征在于：所述呕吐毒素(DON)标准品从呕吐毒素(DON)纯品中稀释得 到，稀释液为去离子水，DON浓度为：0.001ng/mL～1000ng/mL。

5、根据权利要求2所述呕吐毒素的酶联免疫吸附检测专用测试盒的制备， 其特征在于：呕吐毒素-牛血清白蛋白(DON-BSA)偶联物的制备：将DON溶 解在吡啶中，在反应瓶中加入1一丁基硼酸；混合物在室温下搅拌过夜，产生7， 15一氧一(丁基硼)-脱氧雪腐镰刀菌烯醇；再在其中加入琥珀酸酐，并通入氮气； 密封反应瓶，混合物在沸水浴中搅拌90分钟～120分钟，产生3一氧一半琥珀 酰一7，15一氧一(丁基硼)一脱氧雪腐镰刀菌烯醇；将吡啶在室温吹干后，加入 少量的水，然后将残余物溶解于5mL乙酸乙酯中，超声波处理10分钟～30分钟 后，6000rpm～15000rpm下离心5分钟～30分钟，取上清液；将沉淀物用乙酸乙 酯溶解，重复上述操作，合并上清液，将上清液减压浓缩后备用；取浓缩物与 N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、二环己基碳化二亚胺(DCC)溶于N，N-二甲基甲酰 胺(DMF)中，室温振荡10min～60min，离心；将上清液缓慢滴加到牛血清白 蛋白(溶于0.01M～0.2M NaHCO3溶液中)，在2℃～8℃振荡2hr～3hr，然后， 在0.01M～0.2M磷酸盐缓冲液(PBS溶液)(pH7～8)中透析，换透析液3次～8 次；冷冻干燥，偶联物-20℃～-40℃保存；上述反应成分的比例为：DON：1一 丁基硼酸：琥珀酸酐＝(10～1000)mg：(30～4000)mg：(10-2000)mg，3一氧一 半琥珀酰一7，15一氧一(丁基硼)一脱氧雪腐镰刀菌烯醇浓缩物：NHS：DCC： BSA＝(10～2000)mg：(3～1000)mg：(5-2000)mg：(10-6000)mg。

6、根据权利要求2所述呕吐毒素的酶联免疫吸附检测专用测试盒的制备， 其特征在于，呕吐毒素-卵清蛋白(DON-OVA)偶联物的制备：将DON溶解在 吡啶中，在反应瓶中加入1一丁基硼酸，混合物在室温下搅拌过夜，产生7，15 一氧一(丁基硼)-脱氧雪腐镰刀菌烯醇，再在其中加入琥珀酸酐，并通入氮气， 密封反应瓶，混合物在沸水浴中搅拌90分钟～120分钟，产生3一氧一半琥珀 酰一7，15一氧一(丁基硼)一脱氧雪腐镰刀菌烯醇；将吡啶在室温吹干后，加 入少量的水，然后将残余物溶解于乙酸乙酯中，超声波处理10分钟～30分钟后， 6000rpm～15000rpm下离心5分钟～30分钟，取上清液；将沉淀物用乙酸乙醋 溶解，重复上述操作，合并上清液，将上清液减压浓缩后备用；取浓缩物与N- 羟基琥珀酰亚胺(NHS)、二环己基碳化二亚胺(DCC)溶于N，N-二甲基甲酰 胺(DMF)中，室温振荡10分钟～60分钟，离心，将上清液缓慢滴加到卵清蛋 白(溶于0.01M～0.2M NaHCO3溶液中)，在2℃～8℃振荡2hr～3hr，然后，在 0.01M～0.2M磷酸盐缓冲液(PBS溶液)(pH 7～8)中透析，换透析液3次～8 次；冷冻干燥，偶联物-20℃～-40℃保存；上述反应成分的比例为：DON：1一 丁基硼酸：琥珀酸酐＝(10～1000)mg：(30～4000)mg：(10-2000)mg，3一氧 一半琥珀酰一7，15一氧一(丁基硼)一脱氧雪腐镰刀菌烯醇浓缩物：NHS：DCC： OVA＝(10～2000)mg：(3～1000)mg：(5-2000)mg：(10-8000)mg。

7、根据权利要求2所述呕吐毒素的酶联免疫吸附检测专用测试盒的制备， 其特征在于：所述抗呕吐毒素(DON)单克隆抗体及其溶液的制备：取呕吐毒 素-牛血清白蛋白(DON-BSA)偶联物用生理盐水配成0.1μg/μl～10μg/μl抗原溶 液，与等体积完全福氏佐剂混匀，充分乳化，供首次免疫用，加强免疫时用同 量的不完全福氏佐剂代替完全福氏佐剂，首次免疫采用小鼠腹腔内直接注射， 免疫剂量为10μg/只～100μg/只小鼠，以后每隔2周～4周加强免疫一次，加强免 疫采用尾静脉注射，免疫剂量10μg/只～100μg/只，最后一次免疫采用脾内注射， 4天后取脾融合，将分离的免疫小鼠脾细胞与处于对数生长期的骨髓瘤细胞 SP-2/o以10:1比例混合，离心，去除上清，在50S～90S内将0.1ml～10ml50 ％聚乙二醇(分子量为1500)加至细胞中，充分混匀，使其融合，1min～3min后 加入10ml～50ml DMEM培养液，终止融合，水浴静止10min～30min后离心， 去除上清；将融合细胞用含5％～30％小牛血清的HAT选择性培养基悬浮后，以 最后浓度为1×104～1×106饲养细胞/0.1ml接种于以小鼠腹腔巨噬细胞作饲养层 的96孔培养板中，于5％～10％CO2，35℃～45℃条件下培养，5天～10天后，每 培养孔更换2/3HT培养液，10天～20天后，开始对镜检有杂交瘤克隆生长的培 养孔，取上清液进行筛选，对检测结果呈阳性的细胞立即用有限稀释法进行克 隆，杂交瘤筛选采用固相抗原间接非竞争ELISA法进行，以呕吐毒素-卵清蛋白 (DON-OVA)为包被抗原，以免疫小鼠的血清为阳性对照，以SP-2/o骨髓瘤细 胞培养的上清液为阴性对照；阳性细胞孔的判定标准为(A试验-A空白)/(A对照-A 空白)>2.1；对分泌阳性抗体的细胞进行克隆；采用有限稀释法，将阳性克隆细胞 吹匀，取一微滴至培养瓶内，倒置显微镜下准确计数细胞个数，稀释为70个/ ml，再取1ml稀释20倍，接种入96孔培养板中进行亚克隆，直至所有细胞孔 的培养上清均呈阳性为止；对10周龄～13周龄Balb/c小鼠腹腔注射液体石蜡 0.3ml/只～0.5ml/只，8天～10天后，腹腔注射培养至对数期的杂交瘤细胞，5×105 细胞/只，5天后注意观察，收集腹水，离心去除沉淀，加甘油于-20℃～-40℃保 存；上述反应成分的比例为：DON-BSA：生理盐水＝(10～1000)μg： (0.1～10)ml。

8、根据权利要求2所述呕吐毒素的酶联免疫吸附检测专用测试盒的制备， 其特征在于：所述完全福氏佐剂是由下列材料配比而成，液体石蜡：羊毛脂：卡介 苗＝(6～24)g：(10～40)ml：(0.05～0.5)g；所述不完全福氏佐剂是由下列材料 配比而成，液体石蜡：羊毛脂＝(6～24)g：(10～40)ml。

9、根据权利要求2所述呕吐毒素的酶联免疫吸附检测专用测试盒的制备， 其特征在于：所述的酶标记的羊抗鼠抗体冻干品为辣根过氧化物酶-羊抗鼠抗体 冻干品；所述洗涤液为含有吐温和NaN3的磷酸盐缓冲溶液；所述显色液A为含 有过氧化氢的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液；所述显色液B为四甲基联苯二胺的 乙醇溶液；所述终止液为硫酸溶液。

10、呕吐毒素的酶联免疫吸附检测专用测试盒的检测方法，其特征在于： 取包被有DON-OVA的微孔包被板，加入50μL～100μL的DON标准品或处理 好的样品到各自的微孔中，加50μL～100μL抗DON抗体，35℃～45℃孵育0.5h ～1h，洗涤液洗3次～5次，加50μL～100μL辣根过氧化物酶(HRP)-羊抗鼠抗 体，35℃～45℃孵育0.5h～1h，用洗涤液洗3次～5次，加50μL～100μL显色液 A和50μL～100μL显色液B，暗处静置10分钟～20分钟后加终止液，在450nm 处测其吸光度值，从标准曲线计算样品中的DON含量。