1.一株不对称性还原4-羟基-2-丁酮(4H2B)为光学纯(R)-1，3-丁二醇酵母菌株的选育，其特征是以本实验室筛选和保藏的菌株作为供试菌株，以4H2B为底物微生物法生产(R)-1，3-丁二醇，将筛选得到的1株酵母菌株Pichia jadinii HB61，该菌能以4H2B为底物进行生物转化，得到光学纯(R)-1，3-丁二醇(e.e.100％)；

(1)菌株的筛选：

菌种筛选培养：以本实验室筛选和保藏的菌株作为供试菌株，将出发菌株划线于YPD培养基上(酵母膏10g/L，蛋白胨20g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，pH 6.0，0.8MPa灭菌

15min。)培养28h后，挑取单菌落接种于装有100mL种子培养基(酵母膏10g/L，蛋白胨

10g/L，葡萄糖20g/L，0.8M/Pa灭菌15min)的500mL摇瓶中，30℃培养28h；

生物转化：用50ml的离心管收集培养28h后的菌液，离心后收集菌体，用生理盐水洗涤菌体一次后，用5ml 0.1mol/L的磷酸钾(pH 7.0)缓冲液悬浮菌体，加入0.6g葡萄糖，预培养10min后，再加入0.05g 4H2B，然后置于30℃、220r/min条件下振荡培养28h。收集转化液，离心，取上清液以备检测；

(2)1，3-BDO定性检测：

取2ml上清液，用2ml乙酸乙酯进行萃取，然后采用气质联用(GC-MS)鉴定萃取液中是否含有1，3-BDO。气质联用检测条件：采用的色谱柱温控程序为：首先在50℃下保温1min，然后以6℃/min的升温速率升至90℃并保持10min，最后以20℃/min的升温速率升至

230℃。进样口温度为240℃，进样量为1μL，载气为高纯氮气，载气流量1.0mL/min，检测器温度为240℃；

TraeeMS质谱条件：EI+轰击源，全扫描方式，扫描质量范围为30～500amu，发射电流为200μA，电子能量为70eV，质谱检测谱库为NIRT98谱库；

(3)(R)-1，3-丁二醇光学纯度检测：

用气相色谱法(GC)检测乙酸乙酯萃取液中产物1，3-BDO的光学纯度。气相色谱法检测条件如下：varian 3900型气相色谱仪，色谱柱温控程序为：首先在80℃下保温2min，然后以2.5℃/min的升温速率升至140℃并保持10min。进样口温度250℃，进样量为0.5μL，载气为高纯氢气，载气流量1.5mL/min；检测器温度300℃；

(4)菌株鉴定

提取出发菌株的基因组DNA

以出发菌株的基因组DNA为模板，使用酵母菌18S rDNA的通用引物进行扩增P1：5’-ACCGGAATTC GCCTGAGAAACGGCTACC-3’P2：5’-ACCGGAATTC GGCAGGGACGTAATCAAC-3’

PCR方法如下：50μL反应体系中加入：10mol/L的引物P1和P2各0.5μL，2mmol/L的dNTP 5μL，10×ExTaq Buffer 5V，5U/μL 的ExTaq DNA聚合酶0.5μL，模板1μg，加双蒸水补齐50μL；PCR条件为：95℃变性5min，56℃退火90S，72℃延伸2min，94℃变性1min，循环30次；

用胶回收试剂盒纯化PCR扩增产物，电泳验证；连接到pMD18-T载体，转化E.coli JM109。 经Amp抗性筛选，获得阳性克隆。18S rDNA测序由上海生工生物科技有限公司完成，将测序结果在NCBI中与数据库已有序列进行比较分析。

2.根据权利要求1所述的酵母菌株的18S rDNA分析，该酵母菌株分类名称为：

Pichiajadinii，将其命名为Pichia jadinii HB61。

3.根据权利要求2所述的酵母菌株，其特征是将酵母接种于100mL种子培养基(蛋白胨g/L，酵母膏g/L，葡萄糖g/L)的500mL的三角瓶中，30℃，150r/min，培养28h后，离心收集菌体，用生理盐水洗涤菌体一次后，用5ml 0.1mol/L的磷酸钾(pH 7.0)缓冲液悬浮菌体，加入0.05g 4H2B，然后置于30℃、220r/min条件下振荡培养28h。收集转化液，离心，取上清液以备检测；上清液用于对产物进行定性定量检测，测得1，3-丁二醇的含量为7.6g/L。

4.根据权利要求3所述的酵母菌株转化过程，其特征是取2ml上清液，用2ml乙酸乙酯进行萃取，用气相色谱法(GC)检测乙酸乙酯萃取液中产物1，3-BDO的光学纯度。气相色谱法检测条件如下：varian 3900型气相色谱仪，色谱柱温控程序为：首先在80℃下保温

2min，然后以2.5℃/min的升温速率升至140℃并保持10min。进样口温度250℃，进样量为0.5μL，载气为高纯氢气，载气流量1.5mL/min；检测器温度300℃；乙酸乙酯萃取液中测得(R)-1，3-丁二醇的e.e.值为100％。