1、一种二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药抗体,其特征在于通 过在二乙氧基硫代磷酸酯结构上引入合适的活性手臂,制备免疫半抗 原,半抗原偶联牛血清蛋白制备免疫抗原,免疫原免疫新西兰大白兔 制备得到。
2、一种权利要求1所述二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药抗体 的制备方法,其特征在于包括以下步骤:(1)制备二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药免疫半抗原;
(2)制备二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药免疫抗原;
(3)将二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药免疫抗原配合弗氏佐 剂免疫实验动物;
(4)免疫4次后动脉取血,分离抗血清;
(5)抗血清经过抗体纯化步骤得到目标抗体。
3、根据权利要求2所述二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药抗体 的制备方法,其特征在于步骤(1)所述半抗原的制备方法包括以下 步骤:(1)将二乙氧基硫代磷酰氯与羟基肉桂酸或氨基酸在0℃下于 甲醇中进行亲核取代反应;
(2)反应结束,旋转蒸干,复溶于碱性溶液,酸化即可生成目 标半抗原。
4、一种权利要求3所述制备方法制备得到的半抗原,其特征在 于所述半抗原具有式(I)所示的结构:
5、根据权利要求2所述二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药免疫 抗原的制备方法,其特征在于步骤(2)所述免疫抗原的制备方法包 括以下步骤:(1)将二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药半抗原与DCC,NHS 反应形成活泼酯;
(2)将活泼酯滴加入一定浓度的蛋白溶液中,反应过夜;
(3)偶联有二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药半抗原的蛋白用 生理盐水透析3天得到目标抗原。
6、一种权利要求5所述制备方法制备得到的免疫抗原,其特征 在于所述免疫抗原具有式(III)所示的结构:
7、一种权利要求1所述抗体的应用,其特征在于应用于建立有 机磷农药多残留ELISA检测方法。
8、根据权利要求7所述的应用,其特征在于所述的ELISA检测 方法的建立包括以下步骤:(1)制备免疫半抗原和包被半抗原;
(2)制备免疫抗原和包被抗原;
(3)制备多克隆抗体;
(4)以包被抗原包被酶标板;
(5)抗体用PBST稀释至104~106倍,以每孔50μL的量加入酶 标板微孔中,同时加入二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药标准品,每 孔50μl,37℃水浴温育45min,洗涤3次后拍干;
(6)加入辣根过氧化酶标记的羊抗兔二抗,稀释倍数为5000~ 10000倍,每孔100μl,37℃水浴中温育30min,洗涤3次后拍干;
(7)加入TMB底物溶液,每孔100μl,37℃水浴显色15min, 向每孔中加入50μl、10%的硫酸溶液终止反应,于450nm波长下测 各孔的吸光值;
(8)以所获吸光值的平均值计算抑制率,根据各个药物的标准 曲线,计算药物抑制中浓度、最低检测限和线性范围。
9、根据权利要求8所述的应用,其特征在于所述包被半抗原具 有式(II)所示的结构:
其中n为3~6的自然数。
10、根据权利要求8所述的应用,其特征在于所述包被抗原具有 式(IV)所示的结构: