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专利号: 2009100366144
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药的酶联免疫试剂盒,包括盒体、固体载体、特异性抗体溶液、二抗溶液、标准溶液、浓缩提取液、底物液、底物缓冲液、浓缩洗涤液和终止液,其特征在于所述固体载体为酶标板,所述酶标板包被了二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药抗原;所述特异性抗体溶液为抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药的抗体溶液;

所述二抗溶液为辣根过氧化酶标二抗溶液;所述标准溶液为有机磷农药标准溶液;

所述有机磷农药为对硫磷、蝇毒磷、喹硫磷、三唑磷、辛硫磷、除线磷、毒死蜱、乙基溴硫磷、氯唑磷、二嗪磷或治螟磷的任意一种或者两种以上的混合物;

所述二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药抗原是用二乙氧基硫代磷酰氯与氨基己酸亲核取代合成半抗原,再采用活泼酯法将半抗原与载体蛋白进行偶联制备得到;

所述抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药抗体是单克隆抗体;

所述抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药抗体的制备方法包括以下步骤:(1)二乙氧基硫代磷酰氯与对羟基肉桂酸反应合成免疫半抗原;

(2)半抗原偶联载体蛋白得到免疫原;

(3)免疫原免疫Balb/c小鼠制备脾细胞,通过细胞融合,筛选分泌目标抗体的杂交瘤细胞,采用Balb/c小鼠体内诱生法制备腹水,纯化腹水得到抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于所述底物液为过氧化氢或过氧化脲的pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲溶液;所述底物缓冲液为含有3,3,5,5-四甲基联苯胺或邻苯二胺的pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲溶液;所述终止液为5~10%硫酸、盐酸或氢氧化钠溶液;所述浓缩洗涤液为含有0.5~1.0%吐温20的磷酸盐缓冲液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于所述底物液为5~7%过氧化氢或过氧化脲的pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲溶液;所述终止液为10%硫酸溶液;所述浓缩洗涤液为含有1.0%吐温20和0.1mol/L磷酸盐缓冲液。

4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于所述标准品溶液的浓度分别为0ng/mL、

0.2ng/mL、0.8ng/mL、12.8ng/mL、204.8ng/mL、1638.4ng/mL和6553.6ng/mL。

5.一种使用权利要求1所述试剂盒检测样品中二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药残留的方法,其特征在于包括下列步骤:(1)样品前处理;

(2)向权利要求1所述试剂盒的酶标板微孔中加入标准品溶液或样品溶液;加入二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药抗体,温育后洗涤拍干,加入酶标二抗,温育后洗涤拍干,显色、终止,用酶标仪测定吸光值;

(3)检测结果分析。