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专利号: 2009101021574
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一类不饱和脂肪酸-Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物,其特征是Cu/Zn-超氧化物歧化酶上的自由氨基与不饱和脂肪酸上的羧基以酰胺键的形式结合,一个Cu/Zn-超氧化物歧化酶分子结合不多于20个不饱和脂肪酸分子;所述的不饱和脂肪酸的碳链长度为16~

26;所述的不饱和脂肪酸-Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物通过如下方法制备:采用二氯亚砜活化法或者N-羟基琥珀酰亚胺活化法活化不饱和脂肪酸上的羧基,得到不饱和脂肪酸的活化产物;将Cu/Zn-超氧化物歧化酶与不饱和脂肪酸的活化产物加入pH 6.0~9.0缓冲溶液中,在0~30℃下搅拌反应,反应完全后采用预冷丙酮沉淀和凝胶柱层析法分离不饱和脂肪酸-Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物,再经过冷冻干燥制得粉末状不饱和脂肪酸-Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物;所述Cu/Zn-超氧化物歧化酶与不饱和脂肪酸的活化产物的投料摩尔比为1:5~100,其中Cu/Zn-超氧化物歧化酶分子量以30000计算,不饱和脂肪酸的活化产物的摩尔数以不饱和脂肪酸的当量计。

2.根据权利要求1所述的不饱和脂肪酸-Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物,其特征在于所述的不饱和脂肪酸为亚油酸、亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸或二十二碳六烯酸。

3.一种如权利要求1所述的不饱和脂肪酸-Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物的制备方法,其特征在于采用二氯亚砜活化法或者N-羟基琥珀酰亚胺活化法活化不饱和脂肪酸上的羧基,得到不饱和脂肪酸的活化产物;将Cu/Zn-超氧化物歧化酶与不饱和脂肪酸的活化产物加入pH 6.0~9.0缓冲溶液中,在0~30℃下搅拌反应,反应完全后采用预冷丙酮沉淀和凝胶柱层析法分离不饱和脂肪酸-Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物,再经过冷冻干燥制得粉末状不饱和脂肪酸-Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物;所述Cu/Zn-超氧化物歧化酶与不饱和脂肪酸的活化产物的投料摩尔比为1:5~100,其中Cu/Zn-超氧化物歧化酶分子量以

30000计算,不饱和脂肪酸的活化产物的摩尔数以不饱和脂肪酸的当量计。

4.如权利要求3所述的不饱和脂肪酸-Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物的制备方法,其特征在于所述二氯亚砜活化法具体如下:在无溶剂条件下或在有机溶剂A中,不饱和脂肪酸和过量的二氯亚砜在氮气保护下在20~40℃反应2~4小时,回收溶剂即得不饱和脂肪酰氯,即为所述的不饱和脂肪酸的活化产物;所述的有机溶剂A选自下列之一:石油醚、环已烷、正已烷。

5.如权利要求4所述的不饱和脂肪酸Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物的制备方法,其特征在于所述的Cu/Zn-超氧化物歧化酶与不饱和脂肪酰氯在0~30℃下搅拌反应0.5~

2小时。

6.如权利要求3所述的不饱和脂肪酸-Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物的制备方法,其特征在于所述的N-羟基琥珀酰亚胺活化法具体如下:将不饱和脂肪酸溶于有机溶剂B中,加入N-羟基琥珀酰亚胺和N,N’-二环己基碳酰亚胺,在20~40℃反应10~20小时后,过滤取滤液,经纯化得N-羟基琥珀酰亚胺不饱和脂肪酸酯,即为所述的不饱和脂肪酸的活化产物;所述的有机溶剂B选自下列之一:N,N’-二甲基甲酰胺、1,4-二氧六环、二甲基亚砜、四氢呋喃。

7.如权利要求6所述的不饱和脂肪酸-Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物的制备方法,其特征在于所述的Cu/Zn-超氧化物歧化酶与N-羟基琥珀酰亚胺不饱和脂肪酸酯在0~30℃下搅拌反应10~30小时。