1.一种脂肪酶拆分制备(R)-2-甲基丁酸及(R)-2-甲基丁酸乙酯的方法,其特征是分为两步:工艺为:
1)酶法拆分制备(R)-2-甲基丁酸乙酯:
a、选择性水解:取含0.2mol/L(R,S)-2-甲基丁酸乙酯的0.05mol/LKH2PO4/K2HPO4缓冲液于适当的反应容器中,分别加入适量脂肪酶以控制反应速度,由于不同脂肪酶最适反应条件不同,于各自标明的脂肪酶最适反应条件下,200r/min振荡反应;获得ee值为95.0%的剩余底物(R)-2-甲基丁酸乙酯;
b、产物分离:在水解拆分反应体系中,将脂肪酶与反应液离心分离,清液使用正庚烷进行萃取,萃取后的庚烷相用饱和NaHCO3溶液萃取,得到的上层有机相使用硅胶柱分离,使用戊烷将溶剂庚烷洗脱下来,使用乙醚洗脱目的产物(R)-2-甲基丁酸乙酯,乙醚相再经氮吹获得纯的(R)-2-甲基丁酸乙酯;
2)酶法拆分制备(R)-2-甲基丁酸:
c、第二步选择性水解:将第一步水解拆分反应后提取的ee值为95.0%的剩余底物(R)-2-甲基丁酸乙酯作为第二步水解拆分反应的底物,体系中加入10g/L脂肪酶Novozym435,在温度为40℃、转速为200r/min的条件下进行水解反应,反应时间1h,得到第二步水解拆分后的产物ee值为92.2%的(R)-2-甲基丁酸;
d、产物分离:在第二步水解拆分反应体系中,将脂肪酶与反应液离心分离,清液使用正庚烷进行萃取,萃取后的庚烷相用饱和NaHCO3溶液萃取,获得的下层水相使用浓HCl调节pH至1.0,然后使用乙醚萃取,获得的乙醚相使用无水MgSO4干燥过夜,过滤除去无水MgSO4,再经蒸发干燥获得纯的(R)-2-甲基丁酸。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征是步骤a中所用的脂肪酶选用:华根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC M201021脂肪酶(RCL)、固定化的米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶(Lipozyme IM)、南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶(CAL,即Novozym 435)、皱褶假丝酵母(Candida rugosa)脂肪酶(CRL)、猪胰(porcine pancreas)脂肪酶(PPL)、荧光假单胞菌(Pseuclomones fluorescens)脂肪酶(AK)、青霉(Penicillium camemberti)脂肪酶(G)、洋葱假单胞菌(Pseudomonascepacia)脂肪酶(PS)、固定于硅藻土的洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)脂肪酶(PS-D)以及爪哇曲霉(Aspergillus javanicus)脂肪酶(FAP-15)中的一种。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征是步骤a中所用的脂肪酶选用:华根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC M201021脂肪酶(RCL),加入10g/L华根霉脂肪酶(RCL)在4℃下水解反应84h后获得ee值为95.0%的剩余底物(R)-2-甲基丁酸乙酯。