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专利号: 2009102329807
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种脂肪酶拆分制备(R)-2-甲基丁酸及(R)-2-甲基丁酸乙酯的方法,其特征是分为两步:工艺为:

1)酶法拆分制备(R)-2-甲基丁酸乙酯:

a、选择性水解:取含0.2mol/L(R,S)-2-甲基丁酸乙酯的0.05mol/LKH2PO4/K2HPO4缓冲液于适当的反应容器中,分别加入适量脂肪酶以控制反应速度,200r/min振荡反应;

所用的脂肪酶选用:华根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC M201021脂肪酶、或皱褶假丝酵母(Candida rugosa)脂肪酶;

选用华根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC M201021脂肪酶:加入10g/L华根霉脂肪酶在4℃下水解反应84h后获得ee值为95.0%的剩余底物(R)-2-甲基丁酸乙酯;

或选用皱褶假丝酵母(Candida rugosa)脂肪酶:加入20g/L皱褶假丝酵母脂肪酶在

45℃下水解反应12h后获得ee值为85.5%的剩余底物(R)-2-甲基丁酸乙酯;

b、产物分离:在水解拆分反应体系中,将脂肪酶与反应液离心分离,清液使用正庚烷进行萃取,萃取后的庚烷相用饱和NaHCO3溶液萃取,得到的上层有机相使用硅胶柱分离,使用戊烷将溶剂庚烷洗脱下来,使用乙醚洗脱目的产物(R)-2-甲基丁酸乙酯,乙醚相再经氮吹获得纯的(R)-2-甲基丁酸乙酯;

2)酶法拆分制备(R)-2-甲基丁酸:

c、第二步选择性水解:将第一步水解拆分反应后提取的剩余底物(R)-2-甲基丁酸乙酯作为第二步水解拆分反应的底物,体系中加入10g/L脂肪酶Novozym435,在温度为40℃、转速为200r/min的条件下进行水解反应,反应时间1h,得到第二步水解拆分后的产物(R)-2-甲基丁酸;

d、产物分离:在第二步水解拆分反应体系中,将脂肪酶与反应液离心分离,清液使用正庚烷进行萃取,萃取后的庚烷相用饱和NaHCO3溶液萃取,获得的下层水相使用浓HCl调节pH至1.0,然后使用乙醚萃取,获得的乙醚相使用无水MgSO4干燥过夜,过滤除去无水MgSO4,再经蒸发干燥获得纯的(R)-2-甲基丁酸。