1.一种高通量筛选三氮唑类单胺氧化酶抑制剂的方法,所述方法包括:(1)利用“点击化学”方法,构建三氮唑类化合物,所述三氮唑类化合物构建方法如下:+
以等量的式(II)所示的叠氮类化合物和和式(III)所示的炔类化合物为反应底物,在Cu/
2+
Cu 存在下,于叔丁醇的水溶液中,38~32℃摇床反应24h以上,反应结束后,进行质谱分析,如果炔和叠氮类化合物的峰消失,出现新的符合相应的三氮唑的峰,则认为反应完全,生成了式(I)所示三氮唑类化合物,进行下一步操作;
式(I)~(III)中:
R和R1为取代或未被取代的苯环类、杂环类或链烃类取代基;
(2)采用荧光探针法检测三氮唑类化合物的单胺氧化酶活性:取步骤(1)含三氮唑类化合物的反应液,以水稀释至浓度为50~100μM,吸取稀释液加入96孔板的反应孔中,再加入pH8.4硼酸缓冲液和BSA,加入适量MAO-A或MAO-B,混合物在38℃反应3h,然后加入荧光探针,再在38℃反应2h,用全功能荧光分光光度计在λex/λem=365/460nm条件下进行检测,根据荧光值的高低判断三氮唑类化合物对单胺氧化酶抑制活性的高低:荧光强度越强,则抑制活性越弱;反之其抑制活性就越强。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述荧光探针为下列之一:(1)4-甲基-7-(3-氨基丙基)-香豆素、(2)苯丙胺、(3)4-甲基-7-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-氧基)-香豆素。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(1)中叔丁醇与水体积比为1∶1。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(1)中所述三氮唑类化合物构建方法如下:将所述炔类和叠氮类化合物分别溶解在叔丁醇中,制成浓度10mM的溶液1和溶液
2;硫酸铜和抗坏血酸分别溶解在水中,制成硫酸铜浓度0.1mM的溶液3、抗坏血酸浓度1mM的溶液4,取等体积的溶液1、2、3和4混合,38~32℃摇床反应24h以上,反应结束后,进行质谱分析。