1.一种用于蛋白质组学分析的动物蛋白质样品的制备方法,所述方法包括:
(1)组织标本获取:剥离蚯蚓的表皮组织,清洗、用滤纸吸去多余液体,所得组织标本于液氮中速冻后移至-80℃冰箱保存;
(2)冰冻切片:组织标本从-80℃冰箱取出后,用-30℃的冰冻切片机切片,切片厚度
10 μm,每例标本第1张切片用HE染色,以后每张切片只做苏木精染色;
(3)显微捕获切割:将制备好的染色切片放在显微镜的载物台上,直视下比较观察选定要切割的区域,按最大捕获效率设定参数,具体为:光束直径60 μm,光束能量80 mV,激光传递脉冲为1.6 ms,捕获切割取得40 000~50 000个细胞,通过软件对所获取的细胞计数;
(4)样本制备:切割下来的细胞加入组织裂解缓冲液中,冰浴振荡30~40 min,再1~5℃下超声处理2~5次后,离心,取上清,即得蚯蚓蛋白质样品,贮存于-80℃冰箱备用;所述组织裂解缓冲液组成如下:8 mol/L尿素,2 mol/L硫脲,4 % CHAPS,65 mmol/L DTT,0. 2%两性电解质,10 ml/L cocktail。