欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2011102490783
申请人: 贵州师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种刺梨的多指标检测方法,其特征在于:所述检测方法包括理化鉴别、对没食子酸的薄层鉴别,对水分、总灰分及砷和汞的检查,对醇浸出物的测定,对维生素C、总黄酮、总多酚和氨基酸的含量测定方法。

2.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法,其特征在于:所述对没食子酸的薄层鉴别方法为:取刺梨粉末,加无水乙醇80-120HZ超声提取1-3次,过滤,滤液蒸干,加水溶解,过滤,滤液用乙酸乙酯萃取1-3次,合并萃取液,水浴加热蒸干,用甲醇溶解,作为供试品溶液;再取没食子酸对照品加甲醇溶解,作为对照品溶液;照中国药典薄层色谱法试验,吸取上述溶液,点于同一聚酰胺薄膜板上,以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水=

5-15∶0.5-2∶0.5-2∶0.5-2为展开剂,展开,取出,晾干,喷2%的Fecl3-乙醇试剂显色,在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。

3.根据权利要求2所述刺梨的多指标检测方法,其特征在于:所述对没食子酸的薄层鉴别方法为:精密称取刺梨粉末2g,加30mL无水乙醇100HZ超声提取30min,共2次,过滤,滤液蒸干,加水20mL溶解,过滤,滤液用乙酸乙酯20mL萃取,共2次,合并萃取液,80℃水浴加热蒸干,2mL甲醇溶解,作为供试品溶液;再取没食子酸对照品加甲醇,制成1mL含2mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典薄层色谱法试验,吸取上述溶液5μL,点于同一聚酰胺薄膜板上,以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水=10∶1∶1∶1为展开剂,展开,取出,晾干,喷

2%的Fecl3-乙醇试剂显色,在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。

4.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法,其特征在于:所述对维生素C的含量测定方法为:照中国药典高效液相色谱法测定;

色谱条件与系统适用性试验:迪马C18钻石柱4.6mm×250mm,5μm;柱温:30℃,以

0.1mol/L磷酸二氢钾∶甲醇=80-99∶20-1为流动相,流速1.0mL/min,检测波长245nm;

对照品溶液的制备:称取维生素C对照品,精密称定,加0.5-5%的偏磷酸,超声使溶解,加水定容,制成每1mL含0.02mg的溶液,即得;

供试品溶液的制备:精密称取刺梨粉末0.4g,加0.5-3%偏磷酸50mL,称重,超声提取,放冷至室温,补足减失重量,过滤,弃去初滤液,精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中,水定容至刻度,0.45μm微孔滤膜过滤,即得;

测定法:取对照品溶液、供试品溶液,分别进样,测定,即得。

5.根据权利要求4所述刺梨的多指标检测方法,其特征在于:所述对维生素C的含量测定方法为:照中国药典高效液相色谱法测定;

色谱条件与系统适用性试验:迪马C18钻石柱4.6mm×250mm,5μm;柱温:30℃,以

0.1mol/L磷酸二氢钾∶甲醇=97∶3为流动相,流速:1.0mL/min,检测波长:245nm;

对照品溶液的制备:精密称取维生素C对照品12.5mg,加1%的偏磷酸5mL,超声30秒溶解,加水定容至50ml容量瓶中,摇匀,制成每1mL含0.02mg的溶液,即得;

供试品溶液的制备:精密称取刺梨粉末0.4g,加1%偏磷酸50mL,称重,超声提取15分钟,放冷至室温,补足减失重量,过滤,弃去初滤液,精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中,水定容至刻度,0.45μm微孔滤膜过滤,即得;

测定法:取对照品溶液、供试品溶液,分别进样10μL,测定,即得。

6.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法,其特征在于:所述对总黄酮的含量测定方法为:采用三氯化铝比色法测定;

对照品溶液的制备:精密称取芦丁对照品,加乙醇溶解,摇匀,制成每1mL含0.5mg的溶液,即得;

标准曲线的制备:精密吸取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL分别置10mL容量瓶中,各加0.05-5mol/L的三氯化铝溶液1-5mL,0.1-1mol/L的NaAC缓冲溶液0.5-5mL,NaAC缓冲溶液先用HAC调pH=4-7,用乙醇定容至刻度,摇匀,室温静置10-60min,以相应试剂为空白,照中国药典紫外分光光度法,在406nm波长下测吸光度;以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;

测定法:称取刺梨粉0.5g,置25mL平底烧瓶中,精密称定,加50-85%乙醇10-50mL,

50-90℃超声提取0.5-3h,过滤,滤液定容至25mL容量瓶中,摇匀;精密吸取供试品溶液

2mL,加0.05-5mol/L的三氯化铝溶液1-5mL,0.1-1mol/L的NaAC缓冲溶液0.5-5mL,NaAC缓冲溶液先用HAC调pH=4-7,用乙醇定容至刻度,摇匀,室温静置10-60min,以相应试剂为空白,照中国药典紫外分光光度法,在406nm波长下测吸光度值,从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg,计算,即得。

7.根据权利要求6所述刺梨的多指标检测方法,其特征在于:所述对总黄酮的含量测定方法为:采用三氯化铝比色法测定;

对照品溶液的制备:称取芦丁对照品25mg,置50mL容量瓶中,精密称定,加乙醇溶解定容至刻度,摇匀,制成每1mL含0.5mg的溶液,即得;

标准曲线的制备:精密吸取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL分别置10mL容量瓶中,各加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL,0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL,NaAC缓冲溶液先用HAC调pH=5.1,用乙醇定容至刻度,摇匀,室温静置30min,以相应试剂为空白,照中国药典紫外分光光度法,在406nm波长下测吸光度;以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;

测定法:称取刺梨粉0.5g,置25mL平底烧瓶中,精密称定,加65%乙醇20mL,70℃超声提取1h,过滤,滤液定容至25mL容量瓶中,摇匀;精密吸取供试品溶液2mL,加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL,0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL,NaAC缓冲溶液先用HAC调pH=5.1,用乙醇定容至刻度,摇匀,室温静置30min,以相应试剂为空白,照中国药典紫外分光光度法,在406nm波长下测吸光度值,从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg,计算,即得。

8.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法,其特征在于:所述对总多酚的含量测定方法为:采用Folin-Denis法测定;

对照品溶液的制备:称取没食子酸对照品,精密称定,加50-80%乙醇溶解制成每1mL中含没食子酸24μg,即得;

标准曲线的制备:精密吸取24ug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL置25mL容量瓶中,加磷钼酸显色剂1-5mL,2-10%Na2CO32-10mL,水定容至刻度,70℃水浴加热20-100min,以相应试剂作空白,照中国药典紫外分光光度法,在758nm处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;

测定法:称取刺梨粉0.2g,置25mL平底烧瓶中,精密称定,加50-80%乙醇15mL,100HZ超声提取10-60min,过滤,合并滤液,至50mL容量瓶中,水定容至刻度,摇匀;精密量取取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中,加磷钼酸显色剂1-5mL,2-10%Na2CO32-10mL,水定容至刻度,70℃水浴加热20-100min,以相应试剂作空白,照中国药典紫外分光光度法,在758nm处测定吸光度值,从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg,计算,即得。

9.根据权利要求8所述刺梨的多指标检测方法,其特征在于:所述对总多酚的含量测定方法为:采用Folin-Denis法测定;

对照品溶液的制备:称取没食子酸对照品60mg精密称定,置50mL容量瓶中,加60%乙醇溶解定容至刻度摇匀;精密量取1mL,置50mL容量瓶中,加60%乙醇定容至刻度摇匀,即可;

标准曲线的制备:精密吸取24ug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL置25mL容量瓶中,加磷钼酸显色剂3mL,7%Na2CO35mL,水定容至刻度,70℃水浴加热40min,以相应试剂作空白,照中国药典紫外分光光度法,在758nm处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;

测定法:称取刺梨粉0.2g,置25mL平底烧瓶中,精密称定,加60%乙醇15mL,100HZ超声提取30min,共1次,过滤,合并滤液,至50mL容量瓶中,水定容至刻度,摇匀;精密量取取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中,加磷钼酸显色剂3mL,7%Na2CO35mL水定容至刻度,

70℃水浴加热40min,以相应试剂作空白,照中国药典紫外分光光度法,在758nm处测定吸光度值,从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg,计算,即得。

10.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法,其特征在于:所述对氨基酸的含量测定方法为:采用反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定;

色谱条件:Venusil-AA氨基酸分析柱4.6×250mm,5μm,流速1.0mL,检测波长254nm,柱温40℃,流动相80%乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液,PH=6.5,梯度洗脱,A泵醋酸钠-HAc缓冲液,B泵80%乙腈;

对照品溶液的制备:准确量取氨基酸混合标准溶液200μL,置离心管中,精密加入正亮氨酸内标溶液10-30μL,三乙胺乙腈溶液50-200μL,异硫氰酸苯酯乙腈溶液50-200μL混匀,室温放置0.5-3小时,然后加入正己烷200-500μL,振摇后放置5-30分钟,取下层溶液,0.45μm针式微孔滤膜滤器过滤,即得;

样品溶液的制备:精密称取刺梨样品置水解管中,精密加入2-10mol/L盐酸2-10mL,封口,置80-150℃恒温干燥箱中消化水解10-50小时,旋转蒸发仪蒸干溶剂,精密量取2-10mL水超声溶解,过滤,取续滤液100-300μL置1mL离心管中,精密加入正亮氨酸内标溶液

10-50μL,三乙胺乙腈,异硫氰酸苯酯乙腈溶液各50-200μL,混匀,室温放置0.5-3小时,然后加正己烷200-500μL,振摇后放置5-30分钟,取下层溶液用0.45μm微孔滤膜过滤,即得;

测定法:将氨基酸混合标准溶液与样品溶液分别上机测定,即得。

11.根据权利要求10所述刺梨的多指标检测方法,其特征在于:所述对氨基酸的含量测定方法为:采用反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定;

色谱条件:Venusil-AA氨基酸分析柱(4.6×250mm,5μm),流速1.0mL,检测波长

254nm,柱温40℃,流动相80%乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液(PH=6.5)梯度洗脱,A泵醋酸钠-HAc缓冲液,B泵80%乙腈;

对照品溶液的制备:准确量取氨基酸混合标准溶液200μL,置1mL离心管中,精密加入正亮氨酸内标溶液20μL,三乙胺乙腈溶液100μL,异硫氰酸苯酯乙腈溶液100μL混匀,室温放置1小时,然后加入正己烷400μL,振摇后放置10分钟,取下层溶液,0.45μm针式微孔滤膜滤器过滤,即得;

样品溶液的制备:精密称取刺梨样品置水解管中,精密加入6mol/L盐酸4mL,封口,置

110℃恒温干燥箱中消化水解22小时,旋转蒸发仪蒸干溶剂,精密量取5mL水超声溶解,过滤,取续滤液200μL置1mL离心管中,精密加入正亮氨酸内标溶液20μL,三乙胺乙腈,异硫氰酸苯酯乙腈溶液各100μL,混匀,室温放置1小时,然后加正己烷400μL,振摇后放置10分钟,取下层溶液用0.45μm微孔滤膜过滤,即得;

测定法:将氨基酸混合标准溶液与样品溶液分别上机测定,即得。

12.根据权利要求10或11所述刺梨的多指标检测方法,其特征在于:所述氨基酸为天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸,苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸。

13.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法,其特征在于:所述刺梨的检测方法为:

【性状】本品呈扁球形,直径3-4cm,表面黄绿色或黄褐色,少数带红晕,被有密刺,有的具褐色斑点,顶端有宿鄂5瓣,黄褐色,密生细刺;纵剖面观,果肉黄白色,脆;种子多数,着生于鄂筒基部凸起的花托上,卵圆形,浅黄色,骨质,直径0.15-0.3cm,气微香,味酸甜,微涩;鲜果汁呈深棕色,味微甜,涩;

【鉴别】(1)取刺梨鲜果汁2ml,加碱性酒石酸铜试液,置水浴上加热数分钟后,产生红色沉淀;

(2)取刺梨新鲜果汁点于滤纸上,滴加茚三酮试液,100℃烘烤约3-5分钟,产生蓝色;

(3)精密称取刺梨粉末2g,加30mL无水乙醇100HZ超声提取30min,共2次,过滤,滤液蒸干,加水20mL溶解,过滤,滤液用乙酸乙酯20mL萃取,共2次,合并萃取液,80℃水浴加热蒸干,2mL甲醇溶解,作为供试品溶液;再取没食子酸对照品加甲醇,制成1mL含2mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典薄层色谱法试验,吸取上述溶液5μL,点于同一聚酰胺薄膜板上,以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水=10∶1∶1∶1为展开剂,展开,取出,晾干,喷

2%的Fecl3-乙醇试剂显色,在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点;

【检查】水分:照中国药典水分检测法检测,不得过14.0%;

总灰分:照中国药典总灰分检测法检测,不得过6.0%;

砷的测定:采用原子荧光法测定,取刺梨,粉碎,过3号筛,取样品1.0g精密称定,于

250mL的锥形瓶中,加入硝酸16mL、高氯酸4mL,摇动使样品充分接触酸液,静置过夜;次日置于可调温电热板上,先低于100V加热,随着温度的升高,有大量的红棕色气体逸出,当红棕色气体的量减少时可以提高温度继续消化至大量冒白烟,以赶尽HNO3,直至消化完全;当消解液完全蒸干时,取下冷却至室温;小心加入2.5mL浓盐酸,用超纯水转移至50mL容量瓶中,再加入5mL10%的硫脲,超纯水定容至50mL,摇匀,45℃加热30min并冷却至室温后上机测定;

汞的测定:采用原子荧光法测定,取刺梨,粉碎,过3号筛,准确称取样品0.3g于聚四氟乙烯塑料内罐中,加入4mL浓硝酸和2mL30%的过氧化氢,置于100℃水浴锅中煮沸1小时,赶尽NO2;取出冷却至室温,加盖并旋紧密封,然后将高压消解罐放在恒温干燥箱内,升温至

140℃后保持恒温3h,保证消解完全,将高压消解罐拿出自然冷却到室温,小心打开高压消解罐,将聚四氟乙烯塑料内罐中的消解液用4%的盐酸溶液转移到50mL容量瓶,并用盐酸溶液定容,摇匀,室温下放置30min后上机测定;

【浸出物】醇溶性浸出物:照中国药典醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定,用70%的乙醇作溶剂,不得少于40.04%;

【含量测定】

维生素C照中国药典高效液相色谱法测定;

色谱条件与系统适用性试验:迪马C18钻石柱4.6mm×250mm,5μm;柱温:30℃,以

0.1mol/L磷酸二氢钾∶甲醇=97∶3为流动相,流速:1.0mL/min,检测波长:245nm;

对照品溶液的制备:精密称取维生素C对照品12.5mg,加1%的偏磷酸5mL,超声30秒溶解,加水定容至50ml容量瓶中,摇匀,制成每1mL含0.02mg的溶液,即得;

供试品溶液的制备:精密称取刺梨粉末0.4g,加1%偏磷酸50mL,称重,超声提取15分钟,放冷至室温,补足减失重量,过滤,弃去初滤液,精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中,水定容至刻度,0.45μm微孔滤膜过滤,即得;

测定法:取对照品溶液、供试品溶液,分别进样10μL,测定,即得;

总黄酮采用三氯化铝比色法测定;

对照品溶液的制备:称取芦丁对照品25mg,置50mL容量瓶中,精密称定,加乙醇溶解定容至刻度,摇匀,制成每1mL含0.5mg的溶液,即得;

标准曲线的制备:精密吸取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL分别置10mL容量瓶中,各加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL,0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL,NaAC缓冲溶液先用HAC调pH=5.1,用乙醇定容至刻度,摇匀,室温静置30min,以相应试剂为空白,照中国药典紫外分光光度法,在406nm波长下测吸光度;以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;

测定法:称取刺梨粉0.5g,置25mL平底烧瓶中,精密称定,加65%乙醇20mL,70℃超声提取1h,过滤,滤液定容至25mL容量瓶中,摇匀;精密吸取供试品溶液2mL,加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL,0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL,NaAC缓冲溶液先用HAC调pH=5.1,用乙醇定容至刻度,摇匀,室温静置30min,以相应试剂为空白,照中国药典紫外分光光度法,在406nm波长下测吸光度值,从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg,计算,即得;

总多酚采用Folin-Denis法测定;

对照品溶液的制备:称取没食子酸对照品60mg精密称定,置50mL容量瓶中,加60%乙醇溶解定容至刻度摇匀;精密量取1mL,置50mL容量瓶中,加60%乙醇定容至刻度摇匀,即可;

标准曲线的制备:精密吸取24ugmg/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、

7mL置25mL容量瓶中,加磷钼酸显色剂3mL,7%Na2CO35mL水定容至刻度,70℃水浴加热

40min,以相应试剂作空白,照中国药典紫外分光光度法,在758nm处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;

测定法:称取刺梨粉0.2g,置25mL平底烧瓶中,精密称定,加60%乙醇15mL,100HZ超声提取30min,共1次,过滤,合并滤液,至50mL容量瓶中,水定容至刻度,摇匀;精密量取取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中,加磷钼酸显色剂3mL,7%Na2CO35mL水定容至刻度,

70℃水浴加热40min,以相应试剂作空白,照中国药典紫外分光光度法,在758nm处测定吸光度值,从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg,计算,即得。

14.一种刺梨的炮制方法,其特征在于:所述炮制方法为:先在沸水上蒸1-10min,取出,间歇式微波干燥20-60min,干燥时真空度为0.075MPa,功率800-3000w,即得。