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专利号: 2011103004034
申请人: 陕西科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用黄芩毛状根转化对苯二酚合成熊果苷的方法,其特征在于包括以下步骤:培养黄芩毛状根,利用培养后的黄芩毛状根转化对苯二酚合成熊果苷;

所述培养黄芩毛状根的方法为:

1)将黄芩毛状根以4-5g/L接种于黄芩毛状根种子培养基中于100~150r/min下避光震荡培养18~20天得黄芩毛状根种子,培养的温度25~28℃,黄芩毛状根种子培养基为添加40-50g/L蔗糖的改良MS培养基;

2)将黄芩毛状根种子以4-5g/L接种于培养基中于100~150r/min下避光震荡培养20~30天,培养的温度为25~28℃,所述培养基为在改良MS培养基的基础上,添加(a)-(c)之一:(a)0.4mmol/L的苯丙氨酸和30-60g/L蔗糖;

(b)0.4mmol/L的苯丙氨酸和30-60g/L葡萄糖;

(c)0.4mmol/L的苯丙氨酸和30-60g/L蔗糖和葡萄糖的混合物;

所述转化的时间为30~40h,转化时的温度为20~28℃;

所述对苯二酚的加入量为每100mL黄芩毛状根的培养液中加入15~25mg;

所述改良MS培养基包含大量元素、微量元素、铁盐和有机成分,pH为5.4~6.0;

所述大量元素为950mg/L的KNO3、42.5mg/L的KH2PO4、185mg/L的MgSO4·7H2O、220mg/L的CaCl2·2H2O和500mg/L的水解乳蛋白;

所述微量元素为0.83mg/L的KI、6.2mg/L的H3BO3、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2;

所述铁盐为18.65mg/L的Na2·EDTA和13.9mg/L的FeSO4·7H2O;

所述有机成分为100mg/L的肌醇、2mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L盐酸吡哆醇和0.5mg/L的烟酸。

2.根据权利要求1所述一种利用黄芩毛状根转化对苯二酚合成熊果苷的方法,其特征在于:所述对苯二酚在加入前用体积分数70%的乙醇水溶液进行溶解,溶解比例为每1-5mL乙醇水溶液溶解20mg对苯二酚。