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专利号: 2011103134837
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种化学修饰的生麦芽糖淀粉酶,其特征在于其氨基酸序列经过烷基化修饰。

2.权利要求1所述的生麦芽糖淀粉酶,其特征在于所述烷基化修饰用试剂为HNO2。

3.权利要求1或2所述修饰的生麦芽糖淀粉酶的制备方法,其特征在于包括如下步骤:(1)生麦芽糖淀粉酶的制备

根据Genebank基因登陆号(NC007333)化学全合成或以此基因设计引物通过聚合链式反应(PCR)进行扩增,然后克隆到质粒pet20b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞,挑选验证后进行发酵培养,将上清液进行硫酸铵沉淀、离子交换柱纯化,制备生麦芽糖淀粉酶发酵液;

(2)化学修饰剂亚硝酸溶液的制备

制备新鲜的0.2M HNO2溶液,放在4℃冰箱中;

(3)生麦芽糖淀粉酶的化学修饰

将150μL生麦芽糖淀粉酶液加入到170μL的0.1M pH=6的磷酸缓冲液中,然后加入步骤(1)制备的HNO2至终浓度为10-100mM,将混合好的溶液放在37℃的恒温水浴锅中,反应30min左右。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于步骤(2)中所述生麦芽糖淀粉酶的酶液浓度为0.8mg/ml~1.2mg/ml。

5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于步骤(3)中所述HNO2的最佳浓度为45mM。

6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于所述步骤(1)中亚硝酸钠溶液和盐酸溶液应该当天配制且浓度为0.4M。