1.一种用乙醇分级沉淀纯化DNA的方法,其特征在于所述方法为:(1)在PCR扩增产物中加入无水乙醇使得到的混合液乙醇体积终浓度为35~45%,在-20℃下沉淀后,离心收集上清液A,丢弃杂质沉淀A;所述PCR扩增产物中还包含0~0.3mM焦磷酸、0~20.0nM寡核苷酸引物链、0~26.7μM核苷酸和0~0.1U Taq聚合酶;(2)取所述的上清液A加入无水乙醇使得到的上清液A乙醇混合液中乙醇的体积终浓度为60~75%,在-20℃下再沉淀后,离心,除去上清液B,收集沉淀B;(3)取沉淀B用体积浓度为75%乙醇水溶液洗涤后,离心,除去上清液C,收集沉淀C;(4)50℃烘干沉淀C后,再加入TE溶液溶解,获得纯化后的DNA。
2.如权利要求1所述的用乙醇分级沉淀纯化DNA的方法,其特征在于所述步骤(1)中加入无水乙醇使得到的混合液乙醇体积终浓度为38~42%。
3.如权利要求1所述的用乙醇分级沉淀纯化DNA的方法,其特征在于所述步骤(2)中上清液A加入无水乙醇使得到的上清液A乙醇混合液中乙醇的体积终浓度为63~70%。
4.如权利要求1所述的用乙醇分级沉淀纯化DNA的方法,其特征在于所述方法按如下步骤进行:(1)在PCR扩增产物中加入无水乙醇使得到的混合液中乙醇体积终浓度为40%,在-20℃下沉淀2h后,13000rpm离心10min收集上清液A,丢弃杂质沉淀A;所述PCR扩增产物还包含0~0.3mM焦磷酸、0~20.0nM寡核苷酸引物链、0~26.7μM核苷酸和0~
0.1U Taq聚合酶;(2)取所述的上清液A加入无水乙醇使得到的上清液A乙醇混合液中乙醇的体积终浓度为65%,在-20℃下再沉淀2h后,13000rpm离心,除去上清液B,收集沉淀B;
(3)沉淀B用体积浓度为75%乙醇水溶液洗涤后,13000rpm离心10min,除去上清液C,收集沉淀C;(4)50℃烘干沉淀C后,再加入TE溶液溶解,获得纯化后的DNA。
5.如权利要求1~4之一所述的用乙醇分级沉淀纯化DNA的方法,其特征在于所述PCR扩增产物按如下方法制备:1)PCR反应体系:人基因组DNA,引物,终浓度为250μM的dNTPs,50mM KCl,10mM Tris-HCl,1.5mM MgCl2和1U的Taq聚合酶;所述dNTPs由下列组分构成:终浓度为62.5μM的dATP、62.5μM的dTTP、62.5μM的dCTP和62.5μM的dGTP;
2)PCR扩增程序为:94℃变性5min,然后是35个循环,每个循环为94℃变性1min,55℃退火50s,72℃延伸1min,循环结束后,72℃再延伸10min,获得PCR扩增产物;所述PCR扩增产物中还包含0~0.3mM焦磷酸、0~20.0nM寡核苷酸引物链、0~26.7μM核苷酸和0~
0.1U Taq聚合酶。
6.如权利要求1所述的用乙醇分级沉淀纯化DNA的方法,其特征在于所述PCR扩增产物为185~2085bp。
7.如权利要求1所述的用乙醇分级沉淀纯化DNA的方法,其特征在于所述PCR扩增产物包含SNP位点。
8.如权利要求5所述的用乙醇分级沉淀纯化DNA的方法,其特征在于所述PCR扩增产物大小723bps,包含1个SNP位点,所述SNP位点为5’-(G/G)T-3;所述模板为人基因组DNA,所述的引物为:上游引物F2:5’GGGAATGGTGCTCAGTAAAC3’和下游引物R2:
5’GCACTGAAAGTCCAAGGTCC3’。
9.如权利要求5所述的用乙醇分级沉淀纯化DNA的方法,其特征在于所述人基因组DNA终浓度为10ng,引物为终浓度100nM的上游引物F2:5’GGGAATGGTGCTCAGTAAAC3’和
100nM的下游引物R2:5’GCACTGAAAGTCCAAGGTCC3’。