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专利号: 2012100138281
申请人: 广西大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种制备长蛇鲻鱼肉蛋白血管紧张素转换酶抑制肽的方法,其特征在于以长蛇鲻鱼肉蛋白为原料,采用枯草芽孢杆菌1398所产生的中性蛋白酶水解,具体工艺为:(1)往长蛇鲻鱼肉蛋白粉加水制成蛋白含量为2~5%的反应原料液;然后往反应原料液中,加入0.5~5%中性蛋白酶,在35~55℃及pH为6.0~7.5下水解2小时,最后加热至100℃灭酶5~20min得到酶解液;

(2)用分子量为5000Da的超滤膜将酶解液超滤,对超滤透过液以水为流动相通过Sephedex G-15凝胶层析柱进行分离,层析柱流出液用蛋白核酸检测仪在220nm处进行进行检测,根据图1所示的分离蛋白质检测谱图收集3号吸收峰的流出液得到纯化液;

(3)以C18为色谱柱、水和乙腈为流动相以及220nm检测波长二极管阵列检测器监测,采用高效反相液相色谱对纯化液进行二次分离,其中第一次分离以流动相水和乙腈比例-1为95∶5-50∶50,流速0.5mL·min ,根据图2所示的液相色谱第一次分离检测谱图收集7号吸收峰的流出液;第二次对7号吸收峰流出液进行洗脱梯度分离,第一阶段的流动相水和乙腈比例为95∶5-80∶20,维持时间为8min,第二阶段的流动相水和乙腈比例为-1

80∶20-70∶30,维持时间为16min,二阶段流动相的流速均0.5mL·min ,根据图3所示的液相色谱第二次分离检测谱图收集2号吸收峰的流出液;最后对2号吸收峰流出液冷冻干燥即得血管紧张素转化酶抑制肽。