1.一种巨大口蘑原生质体的制备方法,其特征在于,具体包括如下步骤:(1)将巨大口蘑菌丝与渗透压稳定剂混合,于7000~10000r/min离心15~20 min,将所得沉淀用渗透压稳定剂洗涤,得到预处理后的菌丝;
(2)将预处理后的菌丝按每300~500mg菌丝加入1mL的混合酶液中,置于29~32℃水浴恒温培养3.5~4.5h,隔30~40min摇动一次,得到酶解液;
(3)对酶解液进行过滤,滤液于3000~4000r/min离心15~20min,弃上清液,收集沉淀,即得到所述巨大口蘑原生质体;
所述混合酶液中,纤维素酶的质量浓度为3.5~4.0%,蜗牛酶的质量浓度为0.5~1.0%,余量为渗透压稳定剂;所述渗透压稳定剂为0.5mol/L的甘露醇溶液;所述巨大口蘑菌丝为菌龄为7~10d的巨大口蘑菌丝。
2.如权利要求1所述巨大口蘑原生质体的制备方法,其特征在于,所述混合酶液由如下方法制备得到:以渗透压稳定剂溶解纤维素酶和蜗牛酶,于7000~10000r/min离心15~20 min后,用0.22µm的微孔滤膜过滤上清液,所得滤液即为混合酶液。
3.如权利要求1所述巨大口蘑原生质体的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述巨大口蘑菌丝由如下方法制备得到:将巨大口蘑菌丝块接到液体马铃薯葡萄糖琼脂培养基中,于29~32℃、160~180r/min的摇床培养6~8d,然后过滤,取0.4~0.6g过滤后得到的菌丝转移到160~180mL液体马铃薯葡萄糖琼脂培养基中,于29~32℃静置培养7~10 d,过滤去上清液,得到所述巨大口蘑菌丝。
4.如权利要求1所述巨大口蘑原生质体的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,所述过滤为采用6层擦镜纸进行过滤。
5.如权利要求1所述巨大口蘑原生质体的制备方法,其特征在于,步骤(3)完成后,还进行精制,所述精制包括如下步骤:将巨大口蘑原生质体加入1~1.5ml渗透压稳定剂中,于3000~4000r/min离心
15~20min,去上清液,用渗透压稳定剂洗涤下层悬浮液2~3次,再用渗透压稳定剂重悬原生质体,得到巨大口蘑原生质体精制悬液。
6.一种由权利要求1所述制备方法得到的巨大口蘑原生质体,其特征在于,所述巨
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大口蘑原生质体的释放量为9.6×10~9.9×10 个/mL,巨大口蘑原生质体的再生率为
1.08~1.17%。