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专利号: 2012100834930
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种化学-生物酶法组合制备2′-脱氧尿苷的方法,所述方法包括:

(1)以α/β混合构型的3′5′-O-二对氯苯甲酰基-2-脱氧-D-核糖-1-氯化物为原料,加入磷酸和4A分子筛,以三丁基胺为催化剂,-10~0℃于氮气保护下反应16~24小时;

(2)步骤(1)反应结束后,过滤除去分子筛,滤液蒸干得到糖浆状物质用四甲基二戊酮溶解后,水洗,取有机相在-15℃~10℃下加入环己胺搅拌反应至析出白色沉淀,过滤,滤饼依次用四甲基二戊酮和丙酮洗涤,真空干燥得到3,5-O-二(4-苯甲酰氯)-2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸二环己基胺盐;

(3)3,5-O-二(4-苯甲酰氯)-2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸二环己基胺盐在弱碱溶液中于25℃~100℃下搅拌反应12h~72h脱除保护基,反应液浓缩、乙醇洗涤,真空干燥得到2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸盐;所述弱碱溶液为下列之一:环己胺甲醇溶液,氢氧化钠甲醇溶液,氢氧化钾水溶液或氢氧化钠水溶液;

(4)2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸盐与尿嘧啶在尿苷磷酸化酶催化下,在pH值为6~8的磷酸盐缓冲液中、45~65℃下反应3~24小时,制得所述2′-脱氧尿苷。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(1)反应溶剂为乙腈,四甲基二戊酮或丙酮。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(1)中三丁基胺为正三丁基胺,

3′5′-O-二对氯苯甲酰基-2-脱氧-D-核糖-1-氯化物与正三丁基胺的摩尔用量之比为

1∶2~6。