1.一种非标记型均相比色检测铅离子的方法,由下述步骤组成:(1)制备金纳米棒
①制备金种
将7.5mL浓度为0.1mol/L的溴化十六烷基三甲铵加入含有98μL质量分数为1%的HAuCl4和152μL超纯水的烧瓶中,搅拌,加入600μL浓度为10mmol/L的NaBH4,搅拌2分钟,静置2小时,制备成金种;
②制备金纳米棒溶液
在47.6mL 0.1mol/L的溴化十六烷基三甲铵中加入788μL质量分数为1%的HAuCl4和1600μL H2O,再依次加入300μL 0.01M AgNO3和320μL 0.1mol/L抗坏血酸作为还原剂,搅拌2分钟,加入215μL金种,搅拌20秒,30℃静置24小时,制备成金纳米棒溶液装入棕色广口瓶,置于冰箱4℃保存备用;
(2)配制核酸探针母液
按常规方法将T30695核苷酸用10mmol/L pH为7.4的三羟甲基氨基甲烷-醋酸缓冲溶液配制成物质的量浓度为100μmol/L的T30695核酸溶液,储存于-20℃备用;
T30695核苷酸DNA序列为5’-GGGTGGGTGGGTGGGT-3’;
将T30695核酸溶液用10mmol/L pH为7.4的三羟甲基氨基甲烷-醋酸缓冲溶液稀释成5μmol/L的核酸探针母液,置于冰箱4℃保存备用;
(3)测定金纳米棒-核酸探针溶液的紫外光谱
将金纳米棒溶液与10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷-醋酸缓冲溶液混合,并加入
5μmol/L的核酸探针母液混合均匀,5μmol/L的核酸探针母液与10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷-醋酸缓冲溶液、金纳米棒溶液的体积比为1:50~70:150~200,制备成金纳米棒-核酸探针溶液,用紫外分光光度计测定紫外光谱;
(4)制作标准曲线
向金纳米棒-核酸探针溶液中逐级加入铅离子标准溶液,依次配制成物质的量浓度为
5nmol/L、10nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、500nmol/L、1μmol/L、2μmol/L、3μmol/L的 铅离子标准溶液,用紫外分光光度计测定上述不同浓度铅离子标准溶液的紫外光谱,以lg浓度为5nmol/L-1μmol/L铅离子溶液为横坐标X,吸光度的变化值ΔA为纵坐标Y,吸光度的变化值ΔA:ΔA=A0-A
式中A0为金纳米棒-核酸探针溶液中金纳米棒的长轴吸光度,A为在金纳米棒-核酸探针溶液中加入铅离子标准溶液后金纳米棒的长轴吸光度。由origin 8.0软件作图得标准曲线:Y=0.03245X+0.3030
线性相关系数为0.9932;
(5)检测样品溶液中的铅离子
①水样的预处理:
量取自来水100mL,煮沸5分钟去除氯,备用;
②将金纳米棒-核酸探针溶液与预处理的水样按体积比为3:1混合均匀,采用标准加入法进行铅离子的回收,按下式计算铅离子的回收率:R%=m测/m实
式中m测是待测样品中铅的质量,m实是标准样品中铅的质量。
2.根据权利要求1所述的非标记型均相比色检测铅离子的方法,其特征在于:在测定金纳米棒-核酸探针溶液的紫外光谱步骤3中,将金纳米棒溶液与10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷-醋酸缓冲溶液混合,并加入5μmol/L的核酸探针母液混合均匀,5μmol/L的核酸探针母液与10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷-醋酸缓冲溶液、金纳米棒溶液的体积比为1:
55~65:160~200,制备成金纳米棒-核酸探针溶液,用紫外分光光度计测定紫外光谱。
3.根据权利要求1所述的非标记型均相比色检测铅离子的方法,其特征在于:在测定金纳米棒-核酸探针溶液的紫外光谱步骤3中,将金纳米棒溶液与10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷-醋酸缓冲溶液混合,并加入5μmol/L的核酸探针母液混合均匀,5μmol/L的核酸探针母液与10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷-醋酸缓冲溶液、金纳米棒溶液的体积比为1:
60:180,制备成金纳米棒-核酸探针溶液,用紫外分光光度计测定紫外光谱。