1.一种测定三聚氰胺的DNA标记的免疫传感器的构建方法，其特征在于包括：DNA-三聚氰胺抗体偶联物的制备，三聚氰胺包被抗原包被PCR管，三聚氰胺免疫传感器的构建；具体步骤为：（1）DNA-三聚氰胺抗体偶联物的制备

2.5mg双异功能团偶联剂4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐Sulfo-SMCC溶解于200μL超纯水，取2μL Sulfo-SMCC溶液用pH7.4含150mM NaCl的100mM PBS缓冲液稀释至200μL，然后取200μL 6mg/mL的三聚氰胺抗体与200μL Sulfo-SMCC稀释液进行混合，使其终体积为400μL，于室温振荡反应30min，用截留分子量为3000的超滤管对反应物进行超滤，以除去多余的偶联剂；超滤截留物用含5mM EDTA的

100mM PBS缓冲液溶解并恢复其原体积400μL，取200μL上述溶解溶液用于下步反应；将

200μL 4nmol 89bp的ssDNA加入到200μL的溶解溶液中，室温振荡反应30min，反应复合物用截留分子量50000的超滤管超滤，以除去未结合的DNA，此步骤超滤两次，以保证DNA被完全除去；最后截留物再用400μL含5mM EDTA的100mM PBS缓冲液溶解，得到偶联好的DNA-三聚氰胺抗体偶联物；

所述89bp的ssDNA为：

5’-SH-GGGAAAATGC AAGAAGAAGT CATTAGTCCT AGACAACGTT ACTATAACGT GAATGTAATG AACCTACAAG ACCTTCCAGA TTTTTCGGC-3’；

（2）三聚氰胺包被抗原包被PCR管

首先将PCR管用50μL 0.8%的戊二醛溶液在37℃包被5h，然后用超纯水将PCR管洗涤三次，每次5min；用50μL 8μg/mL的三聚氰胺包被抗原包被PCR管，在37℃包被2h，用pH7.2、含0.05% Tween-20、10mM PBS的PBST缓冲液洗涤，再用pH7.2、含0.4%明胶、10mM PBS封闭缓冲液于37℃封闭2h，封闭结束后用上述PBST缓冲液洗涤干净；以上洗涤步骤均洗涤3次，每次3min；

（3）三聚氰胺传感器的构建

在步骤（2）包被好的PCR管中，加入25μL 0.001pg/g～10pg/g的十倍梯度稀释的三聚氰胺标准品，再加入25μL步骤（1）合成的DNA-三聚氰胺抗体偶联物，在37℃反应30min后，用PBST缓冲液洗涤3次，每次3min，最后将PCR管拍打干净；

将上游引物和下游引物加入到SsoFast EvaGreen预混液中，使上游引物和下游引物的最终浓度均为20nM，将预混液充分混匀，每个PCR管中加入50μL含上游引物和下游引物的预混液，最后用荧光定量PCR仪CFX-96进行测定；扩增条件为：首先95℃预变性30s，然后

95℃变性5s、57℃退火和延伸30s，总共为39个循环；再从65℃升温至95℃，每0.5℃读取一次荧光值，得到DNA熔解曲线；

上游引物: 5’-GGGAAAATGCAAGAAGAAGTCAT-3’，

下游引物: 5’-GCCGAAAAATCTGGAAGGTC-3’。