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专利号: 2012103971893
申请人: 中国科学院西北高原生物研究所
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-06-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.掺有糖类干扰物的枸杞多糖提取物中多糖含量的检测方法,其特征在于:所述检测方法包括以下步骤:(1a)称取掺有糖类干扰物的枸杞多糖提取物MS=1.0g,并溶解于V1=50mL水中,然后加入pH值为6.0、体积为1.0mL的磷酸缓冲液,再加入0.3g质量的淀粉酶,搅拌均匀,放置于65℃孵化90分钟并间歇搅拌,然后取出并加热至沸腾;待沸腾液冷却后转移并补水定容至V1=50mL,摇匀,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液;

(2a)准确吸取滤液V2=2mL,加入8mL的无水乙醇,摇匀后静置30min,经离心,得到沉淀物A;

(3a)沉淀物A用质量浓度为95%、温度为50℃的热乙醇洗涤,经离心弃去洗涤上清液,收集沉淀,重复2次,合并得到沉淀物B;沉淀物B用水溶解并定容至V3=50mL,得到供试品溶液;

(4a)精密称取干燥至恒重的葡萄糖标准品20mg,加水溶解并定容至100mL,混匀即得到葡萄糖标准溶液;

分别精确吸取配制好的葡萄糖标准液1、2、3、4、5mL置于10mL容量瓶中稀释定容,得到系列标准溶液;精确吸取各系列稀释标准溶液1mL,置于10mL具塞试管中,加入质量浓度为0.2%硫酸-蒽酮试剂4mL摇匀,置于冰水浴中10min,立即置于沸水浴加热15min,取出用冷水冷却至室温并放置10min,于620nm处测吸光度;另精确吸取蒸馏水1mL,同法操作,作空白对照调零;以吸光度为纵坐标,葡萄糖溶度为横坐标,得到标准曲线方程为:y=2

8.6856x-0.0088,R=0.9989;

然后吸取供试品溶液1mL按标准曲线的相同方法测定其吸光值为0.5253,并将吸光值代入标准曲线方程算得供试品溶液中的多糖浓度C=0.0615mg/mL;

(5a)再根据下式计算即可得到掺有糖类干扰物的枸杞多糖提取物中的多糖含量W:或者,所述检测方法包括以下步骤:

(1b)称取掺有糖类干扰物的枸杞多糖提取物MS=2.0g,并溶解于V1=100mL水中,然后加入pH值为6.5、体积为1.0mL的磷酸缓冲液,再加入0.2g质量的淀粉酶,搅拌均匀,放置于60℃孵化70分钟并间歇搅拌,然后取出并加热至沸腾;待沸腾液冷却后转移并补水定容至V1=100mL,摇匀,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液;

(2b)准确吸取滤液V2=4mL,加入12mL的无水乙醇,摇匀后静置60min,经离心,得到沉淀物A;

(3b)沉淀物A用质量浓度为80%、温度为50℃的热乙醇洗涤,经离心弃去洗涤上清液,收集沉淀,重复4次,合并得到沉淀物B;沉淀物B用水溶解并定容至V3=50mL,得到供试品溶液;

(4b)精密称取干燥至恒重的葡萄糖标准品20mg,加水溶解并定容至100mL,混匀即得到葡萄糖标准溶液;

分别精确吸取配制好的葡萄糖标准液1、2、3、4、5mL置于10mL容量瓶中稀释定容,得到系列标准溶液;精确吸取各系列稀释标准溶液1mL,置于10mL具塞试管中,加入质量浓度为0.2%硫酸-蒽酮试剂4mL摇匀,置于冰水浴中10min,立即置于沸水浴加热15min,取出用冷水冷却至室温并放置10min,于620nm处测吸光度;另精确吸取蒸馏水1mL,同法操作,作空白对照调零;以吸光度为纵坐标,葡萄糖溶度为横坐标,得到标准曲线方程为:y=2

8.6856x-0.0088,R=0.9989;

然后吸取供试品溶液1mL按标准曲线的相同方法测定其吸光值为0.8389,并将吸光值代入标准曲线方程算得供试品溶液中的多糖浓度C=0.0976mg/mL;

(5b)再根据下式计算即可得到掺有糖类干扰物的枸杞多糖提取物中的多糖含量W:或者,所述检测方法包括以下步骤:

(1c)称取掺有糖类干扰物的枸杞多糖提取物MS=1.0g,并溶解于V1=50mL水中,然后加入pH值为7.0、体积为2.5mL的磷酸缓冲液,再加入0.5g质量的淀粉酶,搅拌均匀,放置于80℃孵化60分钟并间歇搅拌,然后取出并加热至沸腾;待沸腾液冷却后转移并补水定容至V1=50mL,摇匀,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液;

(2c)准确吸取滤液V2=2mL,加入10mL的无水乙醇,摇匀后静置10min,经离心,得到沉淀物A;

(3c)沉淀物A用质量浓度为70%、温度为50℃的热乙醇洗涤,经离心弃去洗涤上清液,收集沉淀,重复3次,合并得到沉淀物B;沉淀物B用水溶解并定容至V3=50mL,得到供试品溶液;

(4c)精密称取干燥至恒重的葡萄糖标准品20mg,加水溶解并定容至100mL,混匀即得到葡萄糖标准溶液;

分别精确吸取配制好的葡萄糖标准液1、2、3、4、5mL置于10mL容量瓶中稀释定容,得到系列标准溶液;精确吸取各系列稀释标准溶液1mL,置于10mL具塞试管中,依次加入质量浓度为5%苯酚溶液1.0mL及浓硫酸10mL,混匀并置于沸水浴中加热10min,取出用冷水冷却至室温,于490nm处测吸光度;另精确吸取蒸馏水1mL,同法操作,作空白对照调零;以2

吸光度为纵坐标,葡萄糖浓度为横坐标,得到标准曲线方程为:y=0.7381x-0.0093,R=

0.9985;

然后吸取供试品溶液1mL按标准曲线的相同方法测定其吸光值为0.0434,并将吸光值代入标准曲线方程算得供试品溶液中的多糖浓度C=0.0714mg/mL;

(5c)再根据下式计算即可得到掺有糖类干扰物的枸杞多糖提取物中的多糖含量W:

2.如权利要求1所述的掺有糖类干扰物的枸杞多糖提取物中多糖含量的检测方法,其特征在于:所述步骤(1a)、(1b)或(1c)中的掺有糖类干扰物的枸杞多糖提取物首先通过是否与碘溶液发生呈色反应来进行鉴别。