1.一种利用重组肝素酶II解聚肝素前体制备低分子量肝素的方法,所述方法包括:
(1)从肝素黄杆菌(Flavobacterium heparinum)基因组DNA扩增得到肝素酶II基因片段(Genbank access number U27585.1),克隆到pET-15b表达载体中,获得重组载体pET15b-hepB,pET15b-hepB转化E.coli BL21(DE3)获得重组菌E.coli BL21(DE3)/pET15b-hepB,重组菌经乳糖诱导后,菌液经细胞破碎后提取目标蛋白,获得重组肝素酶II;
(2)Heparosan与重组肝素酶II在缓冲液中于25℃下反应1.5h,反应液经分离纯化,得到解聚后的Heparosan;所述缓冲液组成为:乙酸钠100mM,BSA0.01%,乙酸钙10mM,溶剂为水,pH7.0;缓冲液中Heparosan初始浓度为0.01~0.1g/mL,重组肝素酶II初始添加量为
100~500U/mL;
(3)解聚后的Heparosan进一步进行脱乙酰、硫酸化和异构化,制得所述低分子量肝素。