1.一种检测细胞内硫化氢的荧光探针的制备方法,其特征是,所述的荧光探针结构式如下:包括步骤如下:
(1)将Cy7荧光染料即2-[4-氯-7-(1-乙基-3(二氢吲哚-2-亚基)-2,3-二甲基]-3,5-(丙烷-1,3-二基)-1,3,5-庚三烯-1-基)-1-乙基-3,3-二甲基-3H-吲哚鎓、乙酸钠溶解在无水DMF中,在Ar气保护下加热回流2-4h,得到的混合物冷却后抽滤,母液在-4~20℃低温结晶,抽滤得酮式花菁红棕色晶体;
(2)将邻甲酰基苯甲酸、草酰氯溶解在无水CH2Cl2中然后加入少量DMF,在0℃搅拌
2-6h,得邻甲酰基苯甲酰氯;
(3)将酮式花菁、三乙胺溶于无水CH2Cl2,冷却至0℃,逐滴加入邻甲酰基苯甲酰氯并在
0℃下搅拌10-30min,混合物加热至室温,搅拌过夜,抽滤,旋干,用色谱柱进行分离,旋干得绿色固体。
2.根据权利要求1所述的检测细胞内硫化氢的荧光探针的制备方法,其特征是,步骤(1)中所述的Cy7荧光染料、乙酸钠的质量比为2.3:1;无水DMF用量为每克乙酸钠用
200-300毫升。
3.根据权利要求1所述的检测细胞内硫化氢的荧光探针的制备方法,其特征是,步骤(2)中邻甲酰基苯甲酸、草酰氯、无水CH2Cl2、DMF的用量比例为1.2~3.0:1.0~3.0:20~
30:2~6,g:g:mL:μL。
4.根据权利要求1所述的检测细胞内硫化氢的荧光探针的制备方法,其特征是,步骤(3)中酮式花菁、三乙胺、无水CH2Cl2、邻甲酰基苯甲酰氯的用量比例为1.2~3.0:3~6:
20~30:3~6,g:g:mL:g。
5.根据权利要求1所述的检测细胞内硫化氢的荧光探针的制备方法,其特征是,步骤(3)所述的色谱柱分离洗脱剂为V乙酸乙酯:V甲醇=2:1。