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专利号: 2013100016838
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素A的双抗体夹心法,其特征在于:酶标板上包被了包被抗体JN2011-01,合适的浓度下最大限度捕获SEA;洗板3次,洗去未结合的包被抗体,加入封闭液200μL封闭板孔上多余结合位点;洗板3次,加入样品及对照,37℃孵育1h;洗板3次,加入酶标抗体JN2011-02-HRP,37℃孵育1h;洗板4次,加入显色液显色

12min;

样品中SEA浓度≥0.5ng/mL,样品中SEA被包被抗体JN2011-01捕获并与酶标抗体JN2011-02-HRP结合,并催化底物在450nm产生吸收值,被判定为阳性;

样品中SEA浓度<0.5ng/mL,样品中SEA不被包被抗体JN2011-01捕获或者捕获数量太小不足以引起足够的信号,被判定为阴性。

2.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌肠毒素A的双抗体夹心法,其特征在于:测定步骤为:a、包被:用6μg/mL的JN2011-01包被酶标板,100μL /孔,4℃过夜;

b、洗涤:用PBST洗涤反应板三次,每次3min,200μL / 孔,然后甩干反应板,所述PBST为含0.05%吐温-20的PBS;

c、封闭:含0.2%明胶的0.01M,pH9.6 CBS,200μL /孔,37℃封闭2h;

d、洗涤:同b;

e、样品:用样品稀释液0.01M,pH7.2 PBS将SEA母液稀释成0.125,0.25,0.5,1,2,4,

8ng/mL系列浓度,另设一个PBS空白对照,酶标板1-7列每孔加入100μL系列浓度样品,第

8列加入空白对照,于37℃孵育1h;

f、洗涤:同b;

g、加酶标抗体JN2011-02-HRP,用含有0.1%明胶和0.05%吐温-20的PBS的抗体稀释液稀释至4μg/mL,100μL /孔,37 C孵育1h;

h、洗涤:同b;

i、显色:加显色液 100μL /孔,显色15min;

显色液应在使用前,按照显色液A:显色液B体积比=5:1的比例配置使用;

显色液A:0.933 g柠檬酸,3.68 g Na2HPO4·12H2O,18 μL 30%H2O2,100mL水显色液B:60 mg四甲基联苯胺TMB溶于100 mL乙二醇;

j、终止:加2 mol/L硫酸终止液,50μL /孔;

k、测定:用酶标仪检测OD450nm,绘制SEA双抗体夹心法的标准曲线,样品测定时从该标准曲线上OD450nm值对应求得样品中SEA含量。