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专利号: 2013100093213
申请人: 广西大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种蓝圆鲹鱼肉蛋白抗氧化活性肽的制备方法,其特征在于以蓝圆鲹鱼肉蛋白为原料,采用枯草芽孢杆菌2709所产生的碱性蛋白酶水解,具体工艺为:(1)将蓝圆鲹鱼肉蛋白粉与水混合调成蛋白含量为1~5wt%的反应原料液,然后加入

0.002~0.05wt%碱性蛋白酶,在45~60℃及pH为7.5~10下水解3~6小时,最后加热至100℃灭酶得到酶解液;

(2)将酶解液于4℃,8000r/min离心10~15min,得到上清液并使用分子量为5000Da的超滤膜超滤分离收集渗透液;

(3)以去离子水为流动相采用Sephedex G-15凝胶层析柱分离步骤2得到的渗透液,并用蛋白核酸检测仪于280nm处检测并测定各峰对应的洗脱液的抗氧化活性,收集谱图1高活性的2号吸收峰组分并冻干得到冻干体;

(4)将步骤3得到的冻干体用反相HPLC进一步分离,使用ODS柱Hedera ODS-C2,

10×250mm,采用含0.1%三氟乙酸的水和乙腈为流动相线性洗脱,洗脱梯度为0~25~-1

60min内0~21~50%乙腈,流速1.5mL·min ,220nm波长下检测洗脱峰并收集测定各峰抗氧化活性,根据检测谱图2收集活性最高的1号吸收峰对应的洗脱液;然后改用C18柱Hypersil ODS-C18,4.6×250mm,对1号吸收峰洗脱液进行再次纯化,洗脱梯度为40min内-1

0~20%乙腈,流速0.5mL·min ,根据检测谱图3分别收集较高活性的1号和2号吸收峰对应的洗脱液并冷冻干燥,即得二个抗氧化肽。

2.根据权利要求1所述制备方法得到的蓝圆鲹鱼肉蛋白抗氧化活性肽,其氨基酸序列分别为His-Asp-His-Pro-Val-Cys(组氨酸-天冬氨酸-组氨酸-脯氨酸-缬氨酸-半胱氨酸)和His-Glu-Lys-Val-Cys(组氨酸-谷氨酸-赖氨酸-缬氨酸-半胱氨酸)。