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专利号: 2013100268701
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种家蚕病原微孢子虫LAMP可视化快速检测试剂盒,其特征在于,包括一对内侧引物NFI1/ NBI1和一对外侧引物NF1/ NB1,引物序列如SEQ ID NO:1~4所示;所述家蚕病原微孢子虫为家蚕微孢子虫、菜粉蝶微孢子虫、斜纹夜蛾微孢子虫、桑尺蠖微孢子虫、蝗虫微孢子虫、玉米螟微孢子虫。

2.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包含基因组DNA裂解液、LAMP反应液、阳性对照品、阴性对照品和显色液; 所述LAMP反应液除含有权利要求1所述引物还含有2×LAMP反应缓冲液、Bst DNA 聚合酶、密封液和无菌水。

3.根据权利要求2所述试剂盒,其特征在于,所述2×LAMP反应缓冲液含有20 mM Tris-HCl,pH8.8;10 mM KCl;2 mM MgSO4;20 mM(NH4)2SO4;0.1% Triton X-100;2.8 mM dNTPs;1M甜菜碱;25mM MgCl2。

4.根据权利要求2所述试剂盒,其特征在于,所述DNA裂解液含有10 mM Tris-Cl,pH8.

0;0. 1 M EDTA,pH 8. 0;0. 5% SDS。

5.根据权利要求2所述试剂盒,其特征在于,所述阳性对照品为微孢子虫基因组DNA或含有微孢子虫SSUrRNA基因片段的重组质粒、阴性对照品为正常家蚕组织模板DNA。

6.根据权利要求2所述试剂盒,其特征在于,所述显色液为SYBR Green I、EvaGreen或钙黄绿素。

7.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述试剂盒的反应体系为:

2×LAMP反应缓冲液 12.5μL;

引物NFI1/ NBI1和NF1/ NB1 1μL ;

Bst DNA 聚合酶8U/μL 1μL;

模板DNA 2μL;

无菌水 8.5μL;

引物NF1和NB1的浓度都为5pmol/μL;

引物NFI1和NBI1的浓度都为40pmol/μL。

8.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述试剂盒的LAMP反应条件为60~65℃恒温反应30~90 min;然后 80~100℃,放置1~10 min灭活。

9.根据权利要求2所述试剂盒,其特征在于,所述密封液为甘油。