1.一种小麦胚芽抗肿瘤蛋白的制备方法,其特征在于,包括:
(1)以低温萃取方式对除杂后的新鲜小麦胚芽进行脱脂处理至小麦胚芽粕中的残油值在2.0wt%以下,再将脱脂后的小麦胚芽粕风干后过60~80目筛,除去附着的细粉,而后粉碎过80~100目筛,获得脱脂麦胚粉,其中低温萃取包括超临界二氧化碳萃取、四号溶剂加压萃取或有机溶剂低温萃取;
(2)按10∶1(v/w)的液料比将水与脱脂麦胚粉混合,以180~220r/min的速度振荡提取3h以上,其后低温离心,收集上清液,并将分离出的固形物与水按照4∶1~6∶1的液料比提取1h以上,之后再次低温离心,合并上清液,并分步缓慢加入硫酸铵至达到饱和状态,而后静置3h以上,低温离心出沉淀,加水复溶后装入透析袋中,置于4℃以下的水中透析24h以上,浓缩后冷冻干燥,制得小麦胚芽水溶性蛋白,其中所述低温离心操作的条件包括:转速为8000r/min以上,温度在0~4℃,时间为20min以上;
(3)将小麦胚芽水溶性蛋白溶解于pH值7.4~8.0、10~20mmol/LTris-HCl缓冲液中,且使形成的小麦胚芽水溶性蛋白溶液的浓度为5~10mg/mL,再上样于经过上样缓冲液平衡的DEAE-Sepharose FF阴离子交换柱,并依次以含0mol/L、0.3mol/L、0.8mol/LNaCl的pH值7.4~8.0、10~20mmol/LTris-HCl缓冲液为洗脱剂按照1.0~2.0mL/min的流速进行洗脱,收集洗脱物置于4℃以下的水中透析24h以上,冷冻干燥,分离得到抗肿瘤活性组分;
(4)将抗肿瘤活性组分溶解于pH值7.4、含有50~150mmol/LNaCl,30~60mmol/L磷酸盐缓冲液,且使形成的抗肿瘤活性组分溶液以浓度2~4mg/mL上样于经过平衡的superdex20010/300GL凝胶柱,用所述磷酸盐缓冲液按照0.4mL/min的流速洗脱,获得目标产物。
2.根据权利要求1所述的小麦胚芽抗肿瘤蛋白的制备方法,其特征在于,步骤(2)中
0℃下硫酸铵的饱和度为20wt%~40wt%。