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专利号: 2013100605917
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种运用圆二光谱检测L-半胱氨酸浓度的方法,其特征在于用合成的金纳米粒子与待检测目标物L-半胱氨酸反应,L-半胱氨酸通过Au-S键修饰于金纳米粒子表面,利用L-半胱氨酸的静电相互作用在液体的环境下金纳米粒子与L-半胱氨酸反应形成金纳米粒子二聚体,金纳米粒子二聚体的形成导致等离子手性的产生,金纳米粒子二聚体在可见光区产生圆二光谱CD信号,通过圆二光谱测定液体环境中的CD信号强度来测定L-半胱氨酸含量;

工艺步骤为:

(1)25nm金纳米粒子的合成

25nm金纳米粒子用柠檬酸三钠还原法合成:洁净的三口烧瓶中加入47.5mL超纯水,加入0.8mL质量浓度 0.4%氯金酸溶液,搅拌并加热至沸腾,7-8min后加入1mL 质量浓度1%柠檬酸三钠溶液,溶液从无色变为红色后,停止加热,继续搅拌30min;

(2)金纳米粒子组装

取1000μL步骤 (1) 制备出来的25nm金纳米粒子,8000 rpm离心10min,重悬至相同体积的0.01 M的pH6.0磷酸盐缓冲液中,加入100μL 50nM L-半胱氨酸溶液反应30 min,组装形成金纳米粒子二聚体;

(3)金纳米粒子二聚体结构的表征

步骤(1)制备的25 nm金纳米粒子与步骤(2)制备的金纳米粒子二聚体各取10μL滴于铜网上进行电镜表征;

步骤(1)制备的25 nm金纳米粒子与步骤(2)制备的金纳米粒子二聚体各取1000μL进行动态光散射表征;

(4)圆二光谱检测,绘制CD信号强度~L-半胱氨酸浓度标准曲线

取1000μL步骤 (1) 制备出来的25nm金纳米粒子,8000 rpm离心10 min,重悬至相同体积的0.01M的pH6.0磷酸盐缓冲液中;在该相同体系中分别加入100μL不同浓度0nM、

0.05nM、0.1nM、0.2nM、0.5nM、1nM、2nM、5nM的L-半胱氨酸标准品溶液反应30 min,加入到微量比色皿中,测CD信号,绘制525nm处CD信号强度与L-半胱氨酸浓度标准曲线。