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专利号: 2013100677703
申请人: 华南师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种液相色谱串联质谱分析尿液中苯和甲苯四种代谢产物的方法,其特征在于包括以下步骤:(1)选取反,反粘康酸、1,2-苯二酚、苯巯基尿酸和N-乙酰基卞基半胱氨酸作为苯和甲苯的特征代谢产物;配制含有上述四种特征代谢产物的单一标准品储备溶液、含有上述四种特征代谢产物同位素内标物的单一标准品储备溶液、以及含有上述四种特征代谢产物及其相应的同位素内标物的混合工作标准品溶液;

(2)配制系列浓度的混合标样工作液;系列浓度的混合标样工作液中,内标的浓度保持不变,而目标化合物浓度成比例增长;将系列浓度的混合标样工作液注入色谱柱进行仪器分析,以(标样峰面积/内标样峰面积)为响应值;根据响应值与工作标样浓度之间存在的线性关系,制成标准曲线;

(3)取待测尿样,加入一定量的含四种特征代谢产物同位素内标物混合工作标准品溶液,使内标物的浓度介于标准曲线各浓度点的中部;调节待测样品的pH值为4.5,然后用甲醇、水、醋酸缓冲液分别活化后的固相萃取小柱吸附目标化合物;接着用醋酸缓冲液和水淋洗固相萃取小柱,除去杂质;真空抽干固相萃取小柱,然后用乙腈洗脱目标化合物;洗脱液用氮气吹干后,用少量甲醇溶液溶解,然后进行仪器分析;得到四种特征代谢产物的响应值;

(4)根据已知的系数,求出尿样中四种特征代谢产物的浓度;

步骤(2)和(3)中所述的仪器分析是采用超高压液相色谱串联质谱法,色谱柱采用粒径<2μm的反相C18色谱柱;

所述的超高压液相色谱串联质谱法,质谱条件见表1;色谱分离条件见表2;

表1:质谱条件

表2:液相色谱的分离条件和洗脱程序

表2中的流动相A为甲醇,流动相B为0.1%醋酸水溶液。

2.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱分析尿液中苯和甲苯四种代谢产物的方法,其特征在于:步骤(2)所述系列浓度的混合标样工作液中,反,反粘康酸的浓度范围是

15.63-4000μg/L,1,2-苯二酚的浓度范围是7.81-2000μg/L,苯巯基尿酸的浓度范围是

0.20-200μg/L,N-乙酰基卞基半胱氨酸的浓度范围是0.39-100μg/L。