1.一种检测食品中大肠杆菌E.coli的酶联免疫方法，其特征在于（1）大肠杆菌E.coli单克隆抗体的制备以加热灭活的大肠杆菌E.coli为免疫原，进行免疫、融合、筛选，共筛选到5个细胞株；

所述大肠杆菌E.coli为E.coli O142，保藏号为CMCC44737，购自中国医学微生物菌种保藏管理中心；

（2）单克隆抗体的配对筛选

将纯化后的5株单克隆抗体分别标记辣根过氧化物酶HRP，直接法鉴定标记成功后进行夹心法配对，配对参数如下：包被抗体5μg/mL；包被液为pH9.6、0.01M的碳酸盐缓冲液；

标品浓度100ng/mL，标品稀释液pH7.2、0.01M的PBS；酶标抗体稀释500倍使用，在此条件下，实验成功得到了5对P/N值>2.1的配对；

（3）夹心法的建立

选择检测限最稳定的配对，即以CGMCC No.7202抗体为包被抗体，以CGMCC No.7203抗体为酶标抗体建立夹心法；具体参数如下：抗体包被浓度：5μg/mL，

包被液：pH9.6、0.01M碳酸盐缓冲液，标品稀释液：pH7.2、0.01M的PBS，检测抗体浓度：4μg/mL，

反应时间：包被、封闭：37℃2h；标准品：37℃1h；检测抗体：37℃1h；显色12min；优化5

后大肠杆菌E.coli夹心法，LOD=4.8×10cfu/mL。