1.一种卡那霉素A酶联适配体检测方法,其特征在于,包括如下步骤:S1.用碳酸盐缓冲液稀释链霉亲和素得1~64 μg/mL的包被缓冲液,将包被缓冲液加入微孔板中,每孔100~200 μL,包被过夜,洗涤微孔板后,加入封闭缓冲液封闭,最后烘干;
S2.用PBS缓冲液稀释5’端修饰有生物素的卡那霉素A的ssDNA 适配体得浓度为0.5~8 nmol/L的适配体溶液,将适配体溶液加入步骤S1的微孔板中,每孔100~200 μL,孵育,洗板后拍干;得固相适配体;
S3.用辣根过氧化物酶标记卡那霉素A 分子形成标记竞争物KaA-HRP;
S4.将待测样品和KaA-HRP同时加入步骤S2制备得到的固相适配体中,即可实现卡那霉素A的酶联适配体检测;
所述卡那霉素A的ssDNA 适配体的序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1.用碳酸盐缓冲液稀释链霉亲和素得1~64 μg/mL的包被缓冲液,将包被缓冲液加入微孔板中,每孔100~200 μL,包被过夜,用磷酸盐缓冲液洗涤微孔板后,再加入0.1~0.3%酪蛋白封闭,最后烘干;
S2.用PBS缓冲液稀释5’端修饰有生物素的卡那霉素A的ssDNA 适配体得浓度为0.5~8 nmol/L的适配体溶液,将适配体溶液加入步骤S1的微孔板中,每孔加入100~200 μL,孵育,洗板后拍干;得到固相适配体;
S3.用辣根过氧化物酶标记卡那霉素A 分子形成标记竞争物KaA-HRP;
S4.将待测样品和标记竞争物KaA-HRP同时加入步骤S2制备得到的固相适配体中,即可实现卡那霉素A的酶联适配体检测;
所述卡那霉素A的ssDNA 适配体的序列如SEQ ID NO:1所示。
3.根据权利要求1或2所述检测方法,其特征在于,步骤S1所述包被缓冲液中链霉亲和素的浓度为1~32 μg/mL;步骤S2所述适配体溶液中适配体的浓度为0.5~4 nmol/L。
4.根据权利要求3所述检测方法,其特征在于,步骤S1所述包被缓冲液中链霉亲和素的浓度为7~9 μg/mL;步骤S2所述适配体溶液中适配体的浓度为0.5~1 nmol/L。
5.根据权利要求1或2所述检测方法,其特征在于,步骤S1所述碳酸盐缓冲液为pH
9.6,0.01~0.5 mol/L的碳酸盐缓冲液。
6.根据权利要求1或2所述检测方法,其特征在于,步骤S2所述PBS缓冲液为含有4~6 mM MgCl2的0.01 mol/L pH 7.4的PBS缓冲液。
7.根据权利要求1或2所述检测方法,其特征在于,步骤S3中所述标记的方法为:将卡那霉素A和辣根过氧化物酶按照1:250~300的摩尔比混合后溶于1~2 mL PBS溶液中,加入20~40 mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺,室温反应1~2 h,透析2~4天,即可完成标记。
8.根据权利要求7所述检测方法,其特征在于,所述PBS溶液为0.01 mol/L,pH 7.2的PBS溶液。
9.权利要求1至8任一项所述卡那霉素A酶联适配体检测方法在检测食品中卡那霉素A中的应用。
10.根据权利要求9所述应用,其特征在于,所述食品为牛奶、猪肉、鸡肉、猪肝或蜂蜜。