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专利号: 201310219236X
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种小麦胚芽蛋白源抗氧化肽,其特征在于所述小麦胚芽蛋白源抗氧化肽的序列为SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的序列。

2.一种小麦胚芽蛋白源抗氧化肽的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

(i)将新鲜小麦胚芽依次经脱脂、干燥、粉碎形成脱脂麦胚粉,再经碱沉酸提方法获得脱脂麦胚蛋白粉;

(ii)将脱脂麦胚蛋白粉溶于水配置成脱脂麦胚蛋白悬液,并调节pH值8.0-8.5,在

50-60℃平衡30min以上,然后加入碱性蛋白酶,在50-60℃进行水解反应,同时维持反应体系的pH值保持恒定,水解反应完毕后,将酶解液于90-100℃灭酶10min以上,迅速冷却,在4℃以8000r/min以上的速度离心30min以上,收集上清液,并以截留分子量为

5000-10000Da超滤膜过滤除去大分子物质,将滤液冷冻干燥得麦胚蛋白酶解物;

(iii)将麦胚蛋白酶解物溶于水配置成样品溶液,并使样品溶液通过大孔吸附树脂柱,同时以紫外检测器记录A220nm,当A220nm达到0.05时停止上样,然后依次用水和体积浓度为15-75%的乙醇水溶液进行洗涤和洗脱;

(iv)步骤(iii)得到的乙醇洗脱液在温度45-55℃下蒸发浓缩,再依次进行冷冻干燥和抗氧化活性的测定,收集抗氧化活性最强的组分;

(v)将步骤(iv)所获抗氧化活性最强的组分配置成水溶液,并通过凝胶过滤色谱柱,再用水进行洗脱,按照洗脱峰收集各组分进行冷冻干燥,并进行抗氧化活性的测定,再次收集抗氧化活性最强的组分,即为序列为SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的小麦胚芽蛋白源抗氧化肽。

3.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源抗氧化肽的制备方法,其特征在于,步骤(i)包括:将经正己烷脱脂的新鲜小麦胚芽,置于室温风干后,粉碎过60-80目筛得脱脂麦胚粉,采用碱沉酸提方法得脱脂麦胚蛋白粉。

4.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源抗氧化肽的制备方法,其特征在于,步骤(ii)包括:将脱脂麦胚蛋白粉溶于水形成浓度为5w/v%-10w/v%的脱脂麦胚蛋白悬液,用碱调节pH值至8.0-8.5,在50-60℃条件下平衡30-40min,然后加入0.024AU/g碱性蛋白酶,在

50-60℃条件下进行水解反应4h以上,同时用酸或碱维持反应体系的pH值恒定,水解反应完毕后,将酶解液于90-100℃水浴灭酶10-15min,迅速冷却,在4℃以8000-10000r/min的转速离心30-35min,收集上清液,将上清液依次以普通滤纸和0.45μm微孔滤膜过滤,再采用截留分子量为5000-10000Da超滤膜过滤除去大分子物质,将滤液冷冻干燥,获得麦胚蛋白酶解物。

5.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源抗氧化肽的制备方法,其特征在于,步骤(iii)包括:将步骤(ii)所获麦胚蛋白酶解物溶于水形成浓度为20-30mg/mL的样品溶液,让样品溶液以1-2mL/min流速通过大孔吸附树脂柱,紫外检测器记录A220nm,当A220nm达到0.05时停止上样,然后用水以1-2mL/min流速洗涤1-2个柱体积,再用体积浓度为15-75%的乙醇水溶液以1-2mL/min流速进行洗脱。

6.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源抗氧化肽的制备方法,其特征在于,步骤(iv)包括:将步骤(iii)所获乙醇洗脱液在温度45-55℃下进行旋转蒸发,再将浓缩组分进行冷冻干燥,而后进行抗氧化活性的测定,并收集抗氧化活性最强的组分。

7.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源抗氧化肽的制备方法,其特征在于,步骤(v)包括:将步骤(iv)所获抗氧化活性最强的组分溶于水形成浓度为4-5mg/mL的溶液,以

0.5-1mL/min流速通过凝胶过滤色谱柱,再用水以0.5-1mL/min流速进行洗脱,按照洗脱峰收集各组分进行冷冻干燥,再进行抗氧化活性的测定,再次收集抗氧化活性最强的组分。

8.根据权利要求2或5所述小麦胚芽蛋白源抗氧化肽的制备方法,其特征在于,所述大孔吸附树脂包括DA201-C。

9.根据权利要求2或7所述小麦胚芽蛋白源抗氧化肽的制备方法,其特征在于,所述凝胶过滤色谱柱包括Superdex Peptide10/300GL预装柱。