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专利号: 201310245544X
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种重组表达质粒载体pMA5-YvgN-BgaB,其特征在于所述的重组表达质粒载体包含枯草芽孢杆菌的非经典分泌蛋白质YvgN的编码序列与外源目的蛋白基因BgaB的编码序列融合而获得的基因序列,所述BgaB是来源于嗜热脂肪芽孢杆菌IAM11001的耐热半乳糖苷酶。

2.根据权利要求1所述的重组表达质粒载体pMA5-YvgN-BgaB,其特征在于其中的YvgN来源于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis168。

3.根据权利要求1所述的重组表达质粒载体pMA5-YvgN-BgaB,其特征在于该质粒还包含组成型强启动子HpaII。

4.根据权利要求1所述的重组表达质粒载体pMA5-YvgN-BgaB,其特征在于该质粒还包含氨苄青霉素或卡那霉素抗性选择标记基因。

5.一种构建权利要求1-4任一项所述的重组表达质粒载体pMA5-YvgN-BgaB的方法,其特征在于所述方法包括如下步骤:a)从细菌B.subtilis168菌株中提取基因组DNA;

b)以提取获得的基因组DNA为模板,利用如下引物扩增yvgN基因,克隆得到的PCR产物进行产物纯化,-20℃保存备用,其中扩增的具体引物对如下:YvgNNdeIF:GCGTGAATTCCATATGCCAACAAGTTTAAAAGATACYvgNEcoRIR:GCATGAATTCGGATCCAAACAGAAGCTCATCAGGATc)通过NdeI和EcoRI双酶切PCR产物,经胶回收产物后克隆于经相同酶切的pMA5-ssNprE-BgaB的质粒中得到质粒pMA5-YvgN-BgaB。

6.一种利用权利要求1所述的重组表达质粒载体pMA5-YvgN-BgaB分泌表达BgaB的方法,其特征在于将重组质粒pMA5-YvgN-BgaB转化到枯草芽孢杆菌菌株后进行筛选培养,获得能分泌表达BgaB的阳性克隆。

7.根据权利要求6所述的利用重组表达质粒载体pMA5-YvgN-BgaB分泌表达BgaB的方法,其特征在于,其中被转化的枯草芽孢杆菌菌株是Bacillus subtilis168或其衍生菌株。

8.权利要求6所述的利用重组表达质粒载体pMA5-YvgN-BgaB分泌表达BgaB的方法,其特征在于其中的转化方法是电击法。

9.权利要求1-4任一项的重组表达质粒载体pMA5-YvgN-BgaB用于分泌表达BgaB的。