1.一种用于抑制内皮细胞分化的蟾皮钙调素结合蛋白EDF-1编码基因的克隆方法，其特征在于包括以下步骤：

1）将蟾蜍清洗处死，取其背部皮肤剪成小块后投入液氮中速冻9-15h，置于-70℃超低温冰箱保存备用；

 2）称取步骤1）中一小块蟾蜍背部皮肤，按RNA提取试剂盒说明提取其总RNA，用Quantscript RT kit合成其皮肤第一链cDNA，备用；

3）根据其他两栖类EDF-1 cDNA序列设计上、下游引物，取步骤2）中第一链cDNA 0.8-

1.5μL，加灭菌超纯水至18-22μL，加入与第一链cDNA等量的上、下游引物，在50-98℃循环实施PCR 60-80min；反应结束后，取一部分PCR产物与pUCm-T 连接，转化至E.coli 感受态细胞DH5，然后取2-5mL转化液均匀涂布于LB琼脂盘上，并在37℃恒温培养14-18h，挑取白色菌落接种于10-15mL LB培养基中，实施菌落PCR，将通过菌落PCR确定为阳性的菌落0.2-0.5mL接种于2-4mL含100mg/mL氨苄青霉素-的LB培养液中，再次37℃恒温振荡培养14-18h，然后使用试剂盒进行质粒回收并对其进行EcoR I和Xho I 双酶切，即可。

2.如权利要求1所述的一种用于抑制内皮细胞分化的蟾皮钙调素结合蛋白EDF-1编码基因的克隆方法，其特征在于蟾蜍皮肤液氮中速冻时间为10-14h。

3.如权利要求1所述的一种用于抑制内皮细胞分化的蟾皮钙调素结合蛋白EDF-1编码基因的克隆方法，其特征在于PCR的温度为60-90℃， PCR的时间为65-75min。

4.如权利要求1所述的一种用于抑制内皮细胞分化的蟾皮钙调素结合蛋白EDF-1编码基因的克隆方法，其特征在于转化液均匀涂布于LB琼脂盘上后在37℃恒温培养15-16h。

5.如权利要求1所述的一种用于抑制内皮细胞分化的蟾皮钙调素结合蛋白EDF-1编码基因的克隆方法，其特征在于菌落振荡培养时间为15-16h。