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专利号: 2013105065135
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于单克隆抗体的检测食品中鼠伤寒沙门氏菌的双抗体夹心法,其特征在于步骤为:(1)鼠伤寒沙门氏菌LPS单克隆抗体的制备以混合后的鼠伤寒沙门氏菌ATCC 13311菌体和光滑型的鼠伤寒沙门氏菌LPS为免疫原,免疫 7周龄的BALB/c小鼠,经免疫、融合、筛选,得10株LPS单克隆抗体;

(2)单克隆抗体的配对筛选

将纯化后的10株LPS单克隆抗体分别标记辣根过氧化物酶HRP,直接法鉴定标记成功后进行夹心法配对;配对参数如下:包被抗体5μg/mL;包被液为pH9.6、0.01M的碳酸盐缓冲液;标品浓度10^7cfu/mL;标品稀释液pH7.2、0.01M的PBS;酶标抗体稀释1000倍使用;

(3)夹心法的建立

选择检测限稳定、灵敏的配对,以6E2抗体即CGMCC No.7206分别为包被抗体和酶标抗体建立夹心法;具体参数如下:抗体包被浓度:5μg/mL,

包被液:pH9.6、0.01M的碳酸盐缓冲液,标品稀释液:pH7.2、0.01M的PBS+0.1%Tween,检测抗体浓度:1.6μg/mL,

反应时间:包被、封闭:37℃、2h;标准品:37℃、1h;检测抗体:37℃、1h;显色10min;

优化后鼠伤寒沙门氏菌夹心法LOD:500cfu/mL。