1.一种菜豆植物凝集素凝血活性定量检测方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:(1)对检测用红细胞悬液进行细胞定量;
(2)用已知浓度的菜豆植物凝胶素作为标准品绘制凝血活性浓度标准曲线;
(3)计算出菜豆植物凝集素凝血活性浓度。
2.根据权利要求1所述的菜豆植物凝集素凝血活性定量检测方法,其特征在于,所述步骤(1)具体为:(A)采集新鲜兔血置于5%~10%枸橼酸钠抗凝剂中,与4倍体积阿氏液混匀后置于4℃冰箱保存备用;
(B)将步骤(A)得到的新鲜兔血与生理盐水按5:8的比例缓慢混匀,800~1000rpm离心10分钟,收集沉淀;
(C)重复上述步骤洗涤红细胞,至上清液颜色近乎透明后,按红细胞体积配成20%的红细胞悬液。
(D)取步骤(C)得到的红细胞悬液经生理盐水稀释后计数红细胞,并调整红细胞浓度为
7 8
5×10 个/ml-5×10 个/ml,4℃冰箱保存备用。
3.根据权利要求2所述的菜豆植物凝集素凝血活性定量检测方法,其特征在于,所述步骤(A)中得到的新鲜兔血保存备用不得超过14天。
4.根据权利要求1所述的菜豆植物凝集素凝血活性定量检测方法,其特征在于,所述步骤(2)具体为:(a)在酶标板上,将已知浓度的菜豆植物凝集素标准品二倍稀释六个稀释度;
(b)向上述酶标板各孔加入已定量的红细胞悬液,混合均匀,并静置10分钟,在酶标仪
450nm处读取吸光值,绘制菜豆植物凝集素凝血活性浓度标准曲线。
5.根据权利要求4所述的菜豆植物凝集素凝血活性定量检测方法,其特征在于,所述步骤(a)中,菜豆植物凝集素标准品的浓度为1mg/ml,二倍稀释六个稀释度为1mg/ml、
0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml、0.0625mg/ml和0.03125mg/ml。
6.根据权利要求1所述的菜豆植物凝集素凝血活性定量检测方法,其特征在于,所述步骤(3)具体为:(Ⅰ)将新鲜菜豆植物洗净擦干后称重,置于研钵中,加入质量体积比为1:1的生理盐水,于冰上研碎;
(Ⅱ)将步骤(Ⅰ)得到的菜豆植物在4℃下,8000rpm,离心10min,取上清液;
(Ⅲ)将步骤(Ⅱ)得到的上清液静置5分钟后,再次取上清液,得到菜豆植物凝集素浸提液;
(Ⅳ)在酶标板上,将步骤(Ⅲ)得到的菜豆植物凝集素浸提液二倍稀释三个稀释度;
(Ⅴ)向上述酶标板各孔加入步骤(1)得到的红细胞悬液,混合均匀,并静置10分钟,在酶标仪450nm处读取吸光值,将该值代入步骤(2)得到的菜豆植物凝集素凝血活性浓度标准曲线的公式中,计算得到菜豆植物凝集素凝血活性浓度。
7.根据权利要求6所述的菜豆植物凝集素凝血活性定量检测方法,其特征在于,所述菜豆植物为菜豆豆荚或豆粒。
8.根据权利要求4或6所述的菜豆植物凝集素凝血活性定量检测方法,其特征在于,所述酶标板为96孔。