1.一种淮山药X病毒的多克隆抗体制备方法，其特征在于：原核表达纯化淮山药X病毒的CP蛋白并用于免疫家兔制备多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的淮山药X病毒的多克隆抗体制备方法，其特征在于：所述淮山药X病毒的CP蛋白具有序列表SEQ.ID.No.1的氨基酸序列，或由具有序列表SEQ.ID.No.2的碱基序列的基因所编码。

3.根据权利要求2所述的淮山药X病毒的多克隆抗体制备方法，其特征在于：取纯化后的重组CP蛋白，采用皮下多点注射法免疫新西兰大白兔，以后每2周加强免疫一次，共免疫4次；首次免疫加入与蛋白等量的弗氏完全佐剂，后3次加入与蛋白等量的弗氏不完全佐剂；末次加强免疫7天后，心脏采血，分离血清；再用抗原亲和层析纯化获得该病毒外壳蛋白CP的多克隆抗体。

4.权利要求1至3所得淮山药X病毒的多克隆抗体在检测淮山药X病毒方面的应用。

5.基于权利要求1所述多克隆抗体的淮山药X病毒的ELISA检测方法。

6.根据权利要求5所述的ELISA检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）用1mL抗原包被缓冲液研磨0.1g淮山药新鲜叶片，9000rpm离心5min，取上清液稀释20倍，按照100μl/孔加入ELISA板；感染YVX的淮山药病叶为阳性对照，相应健康叶为阴性对照，37℃孵育2h；

（2）用200μl PBST洗涤两次后，用5%脱脂奶粉封闭30min；

（3）用200μl PBST洗涤两次后，每个孔中加入用抗体稀释缓冲液按照1:8000稀释的多克隆抗体，100μl/孔，37℃孵育1h或室温孵育3h；

（4）用200μl PBST洗涤两次后，每个孔中加入按说明书稀释3000倍的辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG结合物，100μl/孔，室温孵育1h；

（5）用200μl PBST洗涤三次后，用TMB底物显色试剂盒进行显色，室温避光孵育

25-30min，反应产物呈蓝色，每孔再加入50μl0.5M H2SO4终止显色，此时蓝色产物变为亮黄色，立即用酶标仪读取OD450的值，以与阴性OD值比值大于2.1为阳性；

所述PBST 含3.2mM Na2HPO4，0.5mM KH2PO4，1.3mM KCl，135mM NaCl，0.05%Tween20，pH7.4；所述抗原包被缓冲液为碳酸盐缓冲液，30mM碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液，pH9.6；所述抗体稀释缓冲液为1%BSA,0.01M PBS pH7.2。

7.基于权利要求1所述多克隆抗体的淮山药X病毒的Western blot检测方法。

8.根据权利要求7所述的Western blot检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）用TCA/丙酮沉淀法或采用植物蛋白质提取试剂盒提取淮山药总蛋白样品，用Bradford法进行蛋白质定量，调整蛋白质浓度为2mg/mL；

（2）制备蛋白电泳凝胶，进行SDS-PAGE；

（3）半干式转移：电泳结束后将凝胶割至合适大小，用转膜缓冲液平衡，5min×3次；预先裁好与凝胶同样大小的滤纸和PVDF膜，用甲醇浸泡1min后，浸入转膜缓冲液中10min；

转膜装置从下至上依次按阳极碳板、3层3mm滤纸、PVDF膜、凝胶、3层3mm滤纸、阴极碳板的顺序放好，滤纸、凝胶、PVDF膜精确对齐，每一步去除气泡，盖好阴极碳板之后接通电源，2

恒流1mA/cm，转移1.5h，转移结束后，断开电源将膜取出；

（4）免疫反应：用0.01M PBS洗膜，1min；加入封闭液，室温封闭1～2h；弃封闭液，用

0.01M PBST洗膜，5min×3次；加入用抗体稀释缓冲液按照1:5000稀释的YVX的CP蛋白多克隆抗体，室温孵育2h或4℃放置12h以上；阴性对照，以1%BSA取代一抗，其余步骤与实验组相同；弃一抗和1%BSA，用0.01M PBST分别洗膜，5min×4次；加入用0.01M PBS用抗体稀释缓冲液稀释1000倍的碱性磷酸酶标记的羊抗兔IgG结合物，平稳摇动，室温2h；弃二抗，用0.01M PBST洗膜，5min×4次；加入BCIP/NBT显色液，显色至出现条带时放入双蒸水中终止反应；

所述转膜缓冲液为25mM Tris,192mM glycine,0.01%SDS,20%methanol，pH8.3；所述

0.01M PBS含有3.2mM Na2HPO4，0.5mM KH2PO4，1.3mM KCl，135mM NaCl，pH7.4；所述封闭液为5%脱脂奶粉或3%BSA。

9.基于权利要求1所述多克隆抗体的淮山药X病毒的IC-RT-PCR检测方法。

10.根据权利要求9所述的IC-RT-PCR检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）用抗体稀释缓冲液按照1:8000稀释YVX多克隆抗体，每个1.5mL的离心管中加入

100μl稀释好的抗体，37℃孵育1h或室温孵育3h；

（2）将淮山药叶片与含2%PVP的0.02M PBS研磨缓冲液按质量体积比0.2%放入研钵中，研磨成叶汁匀浆，吸入1.5mL离心管中，9000rpm离心10min；

（3）将步骤（1）中包被好抗体的1.5mL离心管用PBST洗两次，加入200μl步骤（2）准备好的叶汁上清液，37℃水浴3h；

（4）移去叶汁，PBST洗3次，DEPC水洗1次，洗毕作短暂离心去除管底余液；

（5）用SuperRT一步法RT-PCR试剂盒进行RT-PCR反应，检测引物为YVX-F：

5’-CCAGGTCCATCAGTCACTTCT-3’和YVX-R：5’-CTAATCTACCAGCAGTCACTTCATA-3’，PCR阶段设置退火温度为55℃，35个循环；

（6）RT-PCR结束后，取5μl的PCR产物用质量体积浓度1.0%琼脂糖凝胶进行电泳检测；

所述抗体稀释缓冲液为1%BSA,0.01M PBS pH7.2。