1.一种利用多重PCR引物快速鉴定扇贝品种的方法,其特征在于方法如下:
1)提取待检测扇贝样品的基因组总DNA,无菌超纯水溶解DNA,调节DNA浓度为5-12ng/μL,制备样品DNA;
2)利用多重PCR引物对样品DNA进行多重PCR扩增;所述的多重PCR引物由栉孔扇贝引物、海湾扇贝引物、虾夷扇贝引物和华贵栉孔扇贝引物组成;
所述的栉孔扇贝引物的DNA序列为:
上游引物 P1:5’ – ATACCCTCCGCTGTCGTCTA –3’ ;
下游引物 P2:5’ – CGCGTCTAATCCCACCGTAA –3’ ;
所述的海湾扇贝引物的DNA序列为:
上游引物 P3:5’ – TGTTCTGATCTTGCCTGGGT –3’ ;
下游引物 P4:5’ – AGCCACATCAAGACACGCAT –3’;
所述的虾夷扇贝引物的DNA序列为:
上游引物 P5:5’ – TGTTGATCTTGGACCGGCAT –3’ ;
下游引物 P6:5’ – GCATACATCATTGCCACCGC –3’ ;
所述的华贵栉孔扇贝引物的DNA序列为:
上游引物 P7:5’ – CCTCCTTTGTCCAGAACTCCT –3’ ;
下游引物 P8:5’ –TCAGCCTTATACGCCTTGCC –3’ ;
3)PCR反应结束后,取产物做琼脂糖凝胶电泳检测;根据琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物大小判定待检测扇贝的种类:如果出现大小为514bp的条带说明样品为栉孔扇贝;如果出现大小为367bp的条带说明样品为海湾扇贝;如果出现大小为205bp的条带说明样品为虾夷扇贝;如果出现大小为149bp的条带说明样品为华贵栉孔扇贝。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(2)中所述多重PCR扩增的反应体系为:5μL 10×PCR buffer,4 μL 浓度为2.5mM的dNTP,0.4μL 浓度为5U/μL的Taq DNA聚合酶,8种浓度分别为0.2mM的P1-P8引物各2μL,1μL样品DNA,无菌超纯水补齐到
50μL。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(2)中所述多重PCR扩增的反应条件为:95℃预变性5min;94℃变性45sec,60℃退火30sec,72℃延伸1min,共30个循环;72℃延伸7min。