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专利号: 2013105667905
申请人: 辽宁大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用多重PCR引物快速鉴定扇贝品种的方法,其特征在于方法如下:

1)提取待检测扇贝样品的基因组总DNA,无菌超纯水溶解DNA,调节DNA浓度为5-12ng/μL,制备样品DNA;

2)利用多重PCR引物对样品DNA进行多重PCR扩增;所述的多重PCR引物由栉孔扇贝引物、海湾扇贝引物、虾夷扇贝引物和华贵栉孔扇贝引物组成;

所述的栉孔扇贝引物的DNA序列为:

上游引物 P1:5’ – ATACCCTCCGCTGTCGTCTA –3’ ;

下游引物 P2:5’ – CGCGTCTAATCCCACCGTAA –3’ ;

所述的海湾扇贝引物的DNA序列为:

上游引物 P3:5’ – TGTTCTGATCTTGCCTGGGT –3’ ;

下游引物 P4:5’ – AGCCACATCAAGACACGCAT –3’;

所述的虾夷扇贝引物的DNA序列为:

上游引物 P5:5’ – TGTTGATCTTGGACCGGCAT –3’ ;

下游引物 P6:5’ – GCATACATCATTGCCACCGC –3’ ;

所述的华贵栉孔扇贝引物的DNA序列为:

上游引物 P7:5’ – CCTCCTTTGTCCAGAACTCCT –3’ ;

下游引物 P8:5’ –TCAGCCTTATACGCCTTGCC –3’ ;

3)PCR反应结束后,取产物做琼脂糖凝胶电泳检测;根据琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物大小判定待检测扇贝的种类:如果出现大小为514bp的条带说明样品为栉孔扇贝;如果出现大小为367bp的条带说明样品为海湾扇贝;如果出现大小为205bp的条带说明样品为虾夷扇贝;如果出现大小为149bp的条带说明样品为华贵栉孔扇贝。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(2)中所述多重PCR扩增的反应体系为:5μL 10×PCR buffer,4 μL 浓度为2.5mM的dNTP,0.4μL 浓度为5U/μL的Taq DNA聚合酶,8种浓度分别为0.2mM的P1-P8引物各2μL,1μL样品DNA,无菌超纯水补齐到

50μL。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(2)中所述多重PCR扩增的反应条件为:95℃预变性5min;94℃变性45sec,60℃退火30sec,72℃延伸1min,共30个循环;72℃延伸7min。