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专利号: 2013105738489
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种小麦胚芽蛋白源锌螯合肽,其特征在于,它包含SEQ ID No.1和/或SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。

2.一种小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

(i) 将脱脂小麦胚芽粉碎成脱脂麦胚粉,而后制成脱脂麦胚蛋白粉;

(ii) 将脱脂麦胚蛋白粉溶于水配置成脱脂麦胚蛋白悬液,并调节pH值8.0-8.5,加入碱性蛋白酶,在50-60 ℃进行水解反应,同时维持反应体系的pH值保持恒定,水解反应完毕后,将酶解液于沸水中灭酶10 min以上,迅速冷却,在4 ℃以8000 r/min以上的速度离心30 min以上,收集上清液,微滤除去杂质,将滤液冷冻干燥得麦胚蛋白酶解物;

(iii) 将麦胚蛋白酶解物溶于水配置成样品溶液,并使样品溶液通过固定化锌离子亲和层析柱,分别用水和含有0.1 mol/L NaCl的磷酸缓冲液进行洗脱;

(iv) 将步骤(iii)所获磷酸缓冲液洗脱液通过大孔吸附树脂DA201-C,用水洗去盐分,再用70V/V%-80 V/V %乙醇水溶液洗脱,并收集洗脱液;

(v) 将步骤(iv)所获洗脱液在35-55℃进行旋转蒸发、冷冻干燥,得到肽粉;

(ⅵ) 将步骤(v)所获肽粉以反相高效液相色谱分离纯化,其中色谱条件包括:检测波长为215 nm,采用10%(v/v)的甲醇溶液作为洗脱液,收集与峰面积最大的峰对应的洗脱物冷冻干燥,获得所述麦胚蛋白源锌螯合肽。

3.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法,其特征在于,步骤(ii)包括:将脱脂麦胚蛋白粉溶于水形成浓度为5 w/v %-10 w/v %的脱脂麦胚蛋白悬浮液,用碱调节pH值至8.0-8.5,然后加入0.024 AU/g碱性蛋白酶,在50-60 ℃条件下进行水解反应200min,同时用酸或碱维持反应体系的pH值恒定,水解反应完毕后,将酶解液于沸水浴灭酶10-15 min,迅速冷却,在4 ℃以8000-10000 r/min的转速离心30-60 min,收集上清液,将上清液以0.45 μm微孔滤膜过滤,滤液经冷冻干燥后,获得麦胚蛋白酶解物。

4.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法,其特征在于,步骤(iii)包括:将步骤(ii)所获麦胚蛋白酶解物溶于水形成浓度为10-20 mg/mL的样品溶液,再使样品溶液以1-2 mL/min的流速通过固定化锌离子亲和层析柱,并以水洗去未结合或弱结合的肽,而后以含有0.1 mol/L NaCl的磷酸缓冲液洗脱出强结合肽。

5.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法,其特征在于,步骤(iv)包括:将步骤(iii)所获磷酸缓冲液洗脱液通过大孔吸附树脂柱,并记录A220nm,当A220nm达到0.05时停止上样,然后用水以1-2 mL/min流速洗涤,当洗脱液的电导率与水一致时,再用70 v/v %-80 v/v %的乙醇水溶液以1-2 mL/min流速进行洗脱。

6.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法,其特征在于,步骤(v)包括:将步骤(iv)所获洗脱液在温度45-55 ℃下进行旋转蒸发,再将浓缩组分进行冷冻干燥。

7.根据权利要求2或4所述小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法,其特征在于,所述固定化锌离子亲和层析柱包括Zn-IDA-壳聚糖柱。

8.根据权利要求2或5所述小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法,其特征在于,所述大孔吸附树脂包括DA201-C树脂。

9.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法,其特征在于,所述反相高效液相色谱柱包括DiamonsilC18柱。