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专利号: 2013105839494
申请人: 湖南师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.可在鉴别不同鱼类的DNA分子标记方法中进行应用的特异引物序列,包括以下的上游引物和下游引物:上游引物:5’-GCCCGATCTCGTCTGATCTCG-3’;

下游引物:5’-GCGCTCAGGTTGGTATGGCCG-3’。

2.一种用权利要求1所述特异引物序列鉴别不同鱼类的DNA分子标记方法,包括以下步骤:(1)根据已知鱼类的5S rDNA基因保守的编码区序列设计所述特异引物;

(2)提取待鉴别鱼类材料样本的基因组;

(3)以上述步骤(2)提取的基因组DNA为模板,设计PCR反应体系扩增其5S rDNA基因,利用5S rDNA基因非转录间隔区的多态性通过PCR扩增反应、琼脂糖凝胶电泳及DNA凝胶回收试剂盒纯化后,获得不同鱼类待检测样本5S rDNA基因的DNA片段模式;

(4)根据凝胶成像中的DNA片段模式,并与已知鱼类的DNA片段模式进行比对,分析判断出待鉴别鱼类材料的种类。

3.根据权利要求2所述的DNA分子标记方法,其特征在于,在上述步骤(4)后继续通过对DNA片段模式进行克隆测序,获得不同鱼类待检测样本的特异5S rDNA基因序列;再根据扩增片段在数目和种类上的共同性和差异性,以及不同已知鱼类特异的5S rDNA基因序列,鉴定出不同鱼类待检测样本所属的种类以及不同鱼类之间的遗传关系。

4.根据权利要求2或3所述的DNA分子标记方法,其特征在于,所述步骤(2)的具体操作方法包括:用注射器从各待鉴别鱼类材料样本的静脉中取血或取部分鳍条;利用DNA提取试剂盒进行各待鉴别鱼类材料样本的基因组DNA的提取。

5.根据权利要求2或3所述的DNA分子标记方法,其特征在于,所述步骤(3)中,PCR反应体系的总体积为25µl,其中含5~10 ng DNA,1.5~2.0 mmol MgCl2,0.2 mmol dNTPs,

0.2~0.4 µmol正负引物,1×buffer和1.25unit TaqTMDNA聚合酶。

6.根据权利要求2或3所述的DNA分子标记方法,其特征在于,所述步骤(3)中,PCR扩增反应的程序为:94℃预变性5min,94℃变性30 s,55℃~58℃退火30s,72℃延伸1min,

25~30个循环后接着72℃10min。