1.一种获得产绿原酸和二咖啡酰奎宁酸的甜叶菊毛状根的方法,特征在于采用转基因技术,用发根农杆菌侵染甜叶菊外植体,包括如下步骤:(1)甜叶菊无菌苗的获得;
(2)采用转基因方法转移发根农杆菌的Ri质粒的T-DNA至甜叶菊叶片中,包括以下步骤:a.发根农杆菌接种在YEB培养基活化;
b.用发根农杆菌侵染甜叶菊无菌外植体;
c.发根农杆菌与甜叶菊外植体共培养;
d.外植体在羧苄西林钠、头孢噻肟钠除菌培养。
(3)甜叶菊毛状根获得与继代培养;
(4)甜叶菊毛状根的分子检测,方法如下:e.提取甜叶菊毛状根DNA;
f.获得含有rolB和rolC引物的PCR反应体系;
g.PCR反应扩增毛状根特有基因rolB和rolC;
h.电泳检测目标条带。
(5)甜叶菊毛状根中绿原酸和二咖啡酰奎宁酸的含量检测;
(6)甜叶菊毛状根中绿原酸和二咖啡酰奎宁酸的提取和纯化。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤b中的外植体,是由甜叶菊种子经过无2
菌培养获得的叶片,并将叶片切成0.1~10cm 的小块。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤d中的羧苄西林钠、头孢噻肟钠浓度分别为0~500mg/L和0~1000mg/L。
4.根据权利要求1所述的方法,利用甜叶菊毛状根提取、纯化获得绿原酸和二咖啡酰奎宁酸,其特征在于生产过程不添加激素,提取和纯化过程简便、成本低。