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专利号: 2013107247778
申请人: 成都大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种提高荞麦细胞同步化的荞麦细胞培养方法,包括荞麦愈伤组织的诱导培养步骤,其特征在于还包括如下步骤:(1)荞麦愈伤组织细胞的预处理:选取产生15~25天、生长良好的荞麦愈伤组织,以

10~25g/L的接种量接入改良的Nitsch+2,4-D1.0~3.0mg/L+水解络蛋白50~150mg/L+谷氨酰胺100~500mg/L的液体培养基中进行悬浮培养,每培养25天继代一次,连续继代2~4次,悬浮培养的条件为:摇床转速120~140r/min、温度20~28℃、每天光照6~

10小时和光照强度为500~800lx,所述改良Nitsch培养基是指肌醇浓度为150~300mg/L的Nitsch培养基;

(2)荞麦细胞同步化的诱导:将步骤(1)培养的荞麦悬浮细胞接入1/2~

1/4MS+2,4-D1.0~3.0mg/L+6-BA0.1~0.3mg/L+L+蔗糖50~100g/L+矮壮素0.5~

1.0mg/L的液体培养基中,在温度为1~3℃、摇床转速为60~100r/min和无光照的条件下振荡培养12~24h,然后再转接到1/2MS+NAA0.5~2.0mg/L+6-BA0.1~0.3mg/L+蔗糖

10~50g/L+甘露醇1~3g/L的培养基中,在5~10℃、无光照和摇床转速为60~100r/min的条件下振荡培养18~24h,最后转接到B5+NAA1.0~3.0mg/L+6-BA0.1~0.3mg/L+蔗糖20~40g/L的培养基中,在20~25℃、无光照和摇床转速为60~100r/min的条件下振荡培养24~48h,将培养的细胞用显微观察并计算出细胞的分裂指数。

2.根据权利要求1所述的一种提高荞麦细胞同步化的荞麦细胞培养方法,其特征在于所述荞麦愈伤组织的诱导培养步骤是:选取当年收获的荞麦种子,去掉种皮后放在超净工作台上,先用0.1%的升汞消毒3~5min,然后用无菌水冲洗5次后接种于MS+2,4-D1.0~

4.0mg/L+KT0.5~2.0mg/L+琼脂5.5~7.5g/L+蔗糖25~35g/L的愈伤组织培养基中,在温度25±3℃、每天光照6~10小时、光照强度为800~1200lx的条件下诱导培养荞麦愈伤组织。