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专利号: 2014100190557
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于适配体的手性传感器检测双酚A的方法,双酚A缩写为BPA,其特征在于包括:金纳米粒子修饰DNA探针,金纳米粒子组装成不对称的二聚体,金纳米粒子组装体应用圆二色光谱CD进行检测;具体步骤为:(1)金纳米粒子修饰DNA探针

首先将新合成的10nm及20nm的金纳米粒子浓缩5倍,使其终浓度分别为20 nM 及5 nM,然后将金纳米粒子与DNA按照1:5的摩尔浓度比进行偶联,即将1 μL 2.5μM的BPA适配体Aptamer修饰到20nm的金纳米粒子的表面,1 μL 10μM的BPA适配体部分互补序列Aptamer-C修饰到10nm的金纳米粒子的表面;通过加盐老化的方法逐步将NaCl加入到金纳米粒子中,使NaCl的终浓度达到50 mM;过夜孵育后,金纳米粒子通过离心去除未偶联的DNA;

Aptamer:5’-SH-CCGGTGGGTG GTCAGGTGGG ATAGCGTTCC GCGTATGGCC CAGCGCATCA CGGGTTCGCA CCA-3’;

Aptamer-C:5’-CCCACCTGAC CACCCACCGG-SH-3’;

(2)金纳米粒子组装成不对称的二聚体

整个组装过程在100μL的反应体系中进行,其中包括20μL 10nm 金纳米粒子-Aptamer和80μL 20nm金纳米粒子-Aptamer-C,反应缓冲液为含0.01% SDS、20mM MgCl

2、40 mM KCl、100 mM NaCl、pH 8.0的0.02 M Tris- HCl缓冲液;室温孵育杂交6h后,即得到组装好的不对称金纳米粒子二聚体,用于下步BPA检测;

(3)金纳米粒子组装体应用圆二色光谱CD进行检测

在不对称的金纳米粒子二聚体中加入一系列不同浓度的BPA标准品,在BPA的作用下,抗BPA的Aptamer识别BPA并与之结合,从而导致适配体互补序列从杂交双链上解离下来;

不同目标BPA浓度下的二聚体含量呈现出差异,随着BPA浓度的增加,二聚体的含量越少,相应的CD信号强度越小;将最终的反应产物用CD光谱进行检测,根据BPA浓度与CD信号强度之间的对应关系,绘制BPA浓度与CD信号强度的标准曲线,从而通过CD信号对BPA的含量进行检测。