1.一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)树脂对发酵液进行吸附:将纤维堆囊菌在液体培养基中进行发酵,并向液体培养基中加入经过处理的大孔树脂,发酵结束后,过滤得到吸附树脂;其中,大孔树脂的加入量为液体培养基体积的2-5%;
(2)乙酸乙酯浸提:用乙酸乙酯浸提吸附树脂,收集浸提液;
(3)浸提液的初步过滤:将浸提液首先通过孔径为0.2-0.5um的微滤膜过滤,除去残留的菌体,得到滤液;再将滤液采用截留分子量为1000-5000的超滤膜过滤以去除大分子杂质,收集滤液,得到粗提物;
(4)埃博霉素B分子印迹膜过滤:首先将博霉素B分子印迹聚合物膜固定在透过装置的原料池和透过池之间,向原料池中加入粗提物,透过池中加入乙酸乙酯,将透过装置密封,搅拌下进行15-30min后,收集透过液得到埃博霉素B溶液;
(5)结晶:将埃博霉素B溶液进行真空浓缩,得到浓缩液,再将浓缩液于-20~-10℃下进行结晶,得到白色粉末状结晶,即为埃博霉素B。
2.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述的步骤(1)中的液体培养基成分为土豆淀粉2.5~3.0g/L,蔗糖0.7~
1.0g/L,葡萄糖0.2~0.5g/L,豆饼粉1.7~2.0g/L,MgSO4·7H2O2.3~2.5g/L,CaCl2 3.0~
3+
3.5g/L,EDTA-Fe 2mL/L,微量元素0.5~1.0mL/L,pH值为7.2;发酵的时间为120-150h。
3.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述步骤(1)中纤维堆囊菌菌株号为ATCC25532或ATCC25569。
4.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述的步骤(1)中大孔树脂的采用如下方法进行处理:首先,用3~5倍大孔树脂体积的甲醇浸泡大孔树脂,摇床震荡12-16h后,去除甲醇溶液,水洗至无甲醇味;再用甲醇浸泡12-16h后,水洗至无甲醇味;大孔树脂为XAD-16型大孔树脂。
5.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述步骤(2)中乙酸乙酯的用量为大孔树脂体积的3~5倍,浸提的时间为
24-48h。
6.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述步骤(3)中微滤膜与超滤膜的材质均为醋酸纤维素、聚砜、聚丙烯、聚丙烯腈、聚乙烯醇或聚酰胺。
7.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述步骤(3)中微滤膜过滤的操作压力为0.1-0.5Mpa,操作温度为0-40℃,控制流速5-10mL/min;超滤膜过滤的操作压力为0.1-0.6MPa,温度0-40℃,控制流速5-10mL/min。
8.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述的埃博霉素B分子印迹聚合物膜是采用如下方法得到的:将埃博霉素B、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯按照摩尔比1:4:20混合均匀后,溶解于体积比为4:1的乙醇和甲醇的混合溶液中,搅拌均匀加入偶氮二异丁氰,充N2反应12h;然后将尼龙微孔滤膜浸泡20min后取出放入两个玻璃片之间,在波长为365nm、功率为400W的紫外灯下照射
10h后,将玻璃片分开,用乙酸:甲醇体积比为1:9的溶液清洗掉埃博霉素B,即得到以尼龙微孔滤膜为支撑材料的埃博霉素B分子印迹聚合物膜;其中,所述体积比为4:1的乙醇和甲醇的混合溶液的用量为20~25mL/1mmol埃博霉素B;偶氮二异丁腈与埃博霉素B的比为
5mg:1mol。
9.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述步骤(4)埃博霉素B分子印迹膜过滤的具体过程如下:透过装置为H型透过装置,包括两个完全相同的500mL带有磨口支管的原料池和透过池,原料池和透过池中间用夹子将埃博霉素B分子印迹聚合物膜固定,保持原料池和透过池底部连通,H型透过装置中的渗透横截面的有效直径为5.5cm,原料池中加入粗提物250mL,透过池中加入乙酸乙酯250mL,将透过装置密封,在搅拌下进行15-30min后,收集透过液即得到埃博霉素B溶液。
10.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述步骤(5)中浓缩的温度为40~45℃,真空度为-0.085~-0.09MPa。