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专利号: 2014100326970
申请人: 陕西科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:无效专利
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于分子印迹吸附技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)树脂对发酵液进行吸附:将纤维堆囊菌在液体培养基中进行发酵,并向液体培养基中加入经过处理的大孔树脂,发酵120~150h后过滤得到吸附树脂;其中,大孔树脂的加入量为液体培养基体积的2-5%;

(2)乙酸乙酯浸提:用乙酸乙酯浸提吸附树脂,收集浸提液;

(3)用超滤膜过滤浸提液:将浸提液采用截留分子量为1000~5000的超滤膜过滤以去除大分子杂质,得粗提物;

(4)添加分子印迹聚合物:向粗提物中加入埃博霉素B分子印迹聚合物来特异性吸附埃博霉素B,在摇床上震荡后离心并收集下层沉淀物,再用甲醇对沉淀物进行多次洗脱,收集洗脱液;其中,埃博霉素B分子印迹聚合物的加入量为粗提物体积的5~10%;

(5)结晶:将洗脱液进行真空浓缩,得浅黄色浓缩液;将浓缩液于-20~-10℃下进行低温结晶,得到白色粉末状结晶,即为埃博霉素B。

2.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹吸附技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述步骤(1)中纤维堆囊菌菌株号为ATCC25532或ATCC25569;液体培养基成分为土豆淀粉2.5~3.0g/L,蔗糖0.7~1.0g/L,葡萄糖0.2~0.5g/L,豆饼粉1.7~2.0g/

3+

L,MgSO4·7H2O2.3~2.5g/L,CaCl23.0~3.5g/L,EDTA-Fe 2mL/L,微量元素0.5~1.0mL/L,pH值为7.2;大孔树脂的型号为XAD-16大孔树脂。

3.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹吸附技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述步骤(1)中大孔树脂采用如下方法进行处理:首先,用3~5倍大孔树脂体积的甲醇浸泡大孔树脂,摇床震荡12-16h后,取出倒掉甲醇,再用纯水洗至无甲醇味;然后再用甲醇浸泡12-16h后,除去甲醇并用纯水洗至无甲醇味。

4.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹吸附技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述步骤(2)中乙酸乙酯的用量为大孔树脂体积的3~5倍,浸提的时间为

24-48h。

5.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹吸附技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述步骤(3)中超滤膜的材质为聚砜、聚丙烯腈或聚酰胺。

6.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹吸附技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述步骤(3)中超滤膜过滤的压力为0.1-0.6MPa,温度0-40℃,流速为5-10mL/min。

7.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹吸附技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述步骤(4)中埃博霉素B分子印迹聚合物的粒径为40-60um;步骤(4)中摇床的转速为100~160r/min,震荡时间为24-48h;步骤(4)中离心是在室温下以2500~

3000r/min的转速离心20~30min。

8.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹吸附技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述步骤(4)中埃博霉素B分子印迹聚合物是由以下方法制得的:将埃博霉素B、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯按照摩尔比1:4:20混合均匀后,再溶解于体积比为

4:1的乙醇和甲醇的混合溶液中,搅拌均匀后加入偶氮二异丁氰;充N2反应12-14h后研磨得颗粒状固体,最后用甲醇洗脱埃博霉素B;其中,偶氮二异丁腈与埃博霉素B的比为5mg:

1mol。

9.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹吸附技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,脱去埃博霉素B的分子印迹聚合物经过甲醇洗涤,然后真空干燥后还能够作为埃博霉素B的特异性吸附剂在分离提取时加入,重复使用次数为2~5次。

10.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹吸附技术的埃博霉素B分离提取方法,其特征在于,所述步骤(5)中浓缩的温度40~45℃,真空度-0.085~-0.09MPa。