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专利号: 2014101203234
申请人: 中国科学院天津工业生物技术研究所
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.酒醅微生物群落中乳酸菌、梭菌、芽孢杆菌的定量分析方法,其特征在于:包括如下步骤:

a、标准曲线的制备:设计针对梭菌、乳酸菌和芽孢杆菌的标准细菌的特异性引物,然后进行荧光定量PCR,根据拷贝数与CT值构建的标准曲线;

b、提取基因组DNA:利用洗脱、酶消化结合的方法提取提取酒醅微生物群落的宏基因组;

c、扩增:采用梭菌、乳酸菌和芽孢杆菌的特异性引物,对酒醅微生物宏基因组中梭菌、乳酸菌和芽孢杆菌的特异性片段进行扩增;

d、定量分析:通过标准曲线和待测样品的CT值对窖泥微生物群落中梭菌、乳酸菌和芽孢杆菌进行定量分析。

2.如权利要求1所述的酒醅微生物群落中乳酸菌、梭菌、芽孢杆菌的定量分析方法,其特征在于:步骤a和c中扩增乳酸菌的特异性引物如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。

3.如权利要求1或2所述的酒醅微生物群落中乳酸菌、梭菌、芽孢杆菌的定量分析方法,其特征在于:步骤a和c中扩增梭菌的特异性引物如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。

4.如权利要求1~3任一项所述的酒醅微生物群落中乳酸菌、梭菌、芽孢杆菌的定量分析方法,其特征在于:步骤a和c中扩增芽孢杆菌的特异性引物如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示。

5.如权利要求1~4任一项所述的酒醅微生物群落中乳酸菌、梭菌、芽孢杆菌的定量分析方法,其特征在于:步骤a中的操作如下:从酒醅微生物群落中提取分离纯化得到的1株梭菌(Clostridium butyricum)、1株乳酸菌(Lactobacillus crustorum)、1株芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的基因组,然后分别利用特异性引物进行PCR得到特异性目的片段,再将目的片段与TA克隆载体连接,获得重组质粒,再将重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞,挑选阳性克隆转化子,提取得到高浓度质粒,然将此高浓度质粒做10倍比稀释,作为荧光定量PCR的标准样品,从而进行荧光定量PCR获得标准曲线。

6.如权利要求1~5任一项所述的酒醅微生物群落中乳酸菌、梭菌、芽孢杆菌的定量分析方法,其特征在于:步骤a和c中扩增梭菌特异性片段的PCR反应程序为:95℃预变性4min后,进入30个循环,95℃1min;57℃1min;72℃1min,最后72℃延伸10min;扩增乳酸菌、芽孢杆菌特异性片段的PCR反应程序为:95℃预变性4min后,进入30个循环,

95℃1min;55℃1min;72℃1min,最后72℃延伸10min。