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专利号: 2014101543880
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种直接检测呋喃它酮代谢物AMOZ的树状半抗原,其特征在于,所述树状半抗原是将AMOZ的乙醛酸衍生物偶联在四分支聚酰胺-胺的活性氨基末端得到,树状半抗原的结构如式(Ⅲ)所示:。

2.权利要求1所述用于直接检测呋喃它酮代谢物AMOZ的树状半抗原的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:S1.制备AMOZ的乙醛酸衍生物:将AMOZ和乙醛酸分别溶于无水乙醇中,搅拌条件下将乙醛酸的乙醇溶液滴加到AMOZ乙醇溶液中,搅拌过夜;AMOZ和乙醛酸的摩尔比为1:1.2,反应结束,真空抽滤,依次用乙醇和乙醚洗涤,得具有式(Ⅰ)所示分子结构的AMOZ的乙醛酸衍生物;

S2.制备左侧氨基用Boc保护了的四分支聚酰胺-胺:乙二胺与丙烯酸甲酯作为原料,反应遵循Michael加成和酰胺化缩合反应,以乙二胺为核,一端氨基用叔丁氧羰基保护,与丙烯酸甲酯进行Michael加成反应,得到Boc-Eddp-OCH3;将乙二胺的一端氨基用芴甲氧羰酰基保护,将Boc-Eddp-OCH3与过量Fmoc保护的乙二胺进行酰胺化缩合反应,得到Boc-Eddp-(Fmoc- Ethylenediamine)2,去Boc保护得到H-Eddp-(Fmoc- Ethylenediamine)2;将H-Eddp-(Fmoc- Ethylenediamine)2进一步与Boc-Eddp-OCH3进行酰胺化缩合反应,得到Boc-Eddp-(Eddp)2-(Fmoc- Ethylenediamine)4,去Fmoc保护得到左侧氨基用Boc保护了的四分支聚酰胺-胺;

S3.将左侧氨基用Boc保护了的四分支聚酰胺-胺与过量AMOZ的乙醛酸衍生物进行酰胺化缩合反应,得到Boc-Eddp-(Eddp)2-(AMOZ-2-iminoacetyl-Ethylenediamine)4,脱去Boc氨基保护基,得到式(Ⅲ)所示分子结构的AMOZ树状半抗原。

3.一种直接检测呋喃它酮代谢物AMOZ的人工树状抗原,其特征在于,具有式(Ⅴ)所示分子结构:。

4.权利要求3所述用于直接检测呋喃它酮代谢物AMOZ的人工树状抗原的制备方法,其特征在于,采用戊二醛偶联法将权利要求1中所述具有式(Ⅲ)所示分子结构的AMOZ树状半抗原与载体蛋白偶联制备得到;具体包括如下步骤:将具有式(Ⅲ)所示分子结构的AMOZ树状半抗原溶于PBS缓冲溶液中,与含有10mg/mL载体蛋白的PBS缓冲溶液混合,搅拌过程中逐滴加入适量2.5%的戊二醛水溶液,室温避光反应3h,4℃用PBS透析2天,每天更换透析液3次;所述AMOZ树状半抗原与载体蛋白的摩尔比为60:1。

5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于所述载体蛋白为牛血清蛋白、匙孔血蓝蛋白或卵清蛋白。

6.权利要求3所述AMOZ的人工树状抗原在制备AMOZ抗体或在检测AMOZ中的应用。

7.一种直接检测呋喃它酮代谢物AMOZ的快速免疫分析方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1.将权利要求3具有式(Ⅴ)所示分子结构的AMOZ人工抗原免疫动物制备AMOZ的多克隆抗体;

S2将具有式(Ⅵ)所示分子结构人工包被抗原作为包被原包被在微孔板上,将步骤S1制备得到的AMOZ的多克隆抗体加入微孔板中;

S3.采用竞争CLEIA测定待测样品中AMOZ的含量。