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专利号: 2014101652623
申请人: 安徽师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-08
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将DNA序列分别溶解在pH7.4的Tris-HCl缓冲溶液中,并在4℃下保存备用,所述DNA序列为巯基化的DNA序列S1、3’端修饰氨基的DNA序列S2;

(2)使用琥珀酰亚胺耦合法EDC-NHS将叶酸FA结合到3’端修饰氨基的S2上:

0.5mL 20μM S2与0.5mL 100mM Tris-HCl缓冲溶液混合均匀后于37℃黑暗中培养3h,其中Tris-HCl缓冲溶液的pH7.4,缓冲溶液含10mM FA,1mM EDC,5 mM N-羟基硫代琥珀酰亚胺;

(3)FA-S2溶液在pH7.4的PBS缓冲溶液中进行透析,分离多余的FA,其中多余的FA分子量筛截:截留分子量为1000Da;

(4)将叶酸受体FR加入到上述透析过的溶液中,黑暗中再培养一段时间;

(5)加入ExoI酶于步骤(4)得到的混合溶液中,水解完成后S2/FA-FR形成;

(6)先利用化学还原法合成尺寸均匀的AuNPs分散溶液,再将有巯基修饰的DNA序列S1修饰到粒子表面,然后将S1-AuNP与步骤(5)中S2/FA-FR溶液混合均匀,振荡以得到较稳定的溶液。

2.如权利要求1所述的DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法,其特征在于,步骤(4)中FR为标准系列浓度,37℃黑暗中培养2h,和/或步骤(5)中加入400U/mL ExoI酶,和/或水解30分钟。

3.如权利要求1或2所述的DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法,其特征在于,步骤(6)中,400μL S1-AuNPs与200μL步骤(5)中S2/FA-FR溶液混合均匀,轻轻振荡5分钟以得到较稳定的溶液,然后将此溶液于黑暗中培养2h后得到系列标准比色溶液。

4.一种DNA修饰的金纳米比色传感器,其特征在于,其由权利要求1所述的方法制备得到。

5.一种权利要求4所述金纳米比色传感器的用途,其特征在于,基于尾端保护比色检测叶酸受体。

6.一种权利要求4所述金纳米比色传感器的用途,其特征在于,适用于FR的可视实时检测,检测范围为0.5-50μg/mL。